Giardia duodenum dia zavamanana parasy izay miteraka giardiasis, areti-mifindra mahazatra indrindra amin'ny ankizy kely misy soritr'aretin'ny aretim-pivalanana.Efa voalazanay teo aloha fa ny extracellular G. duodenalis dia miteraka ny fampahavitrihana ny intracellular oligomerization-like receptor 3 (NLRP3) mifamatotra amin'ny nucleotides ary manara-maso ny valin'ny areti-mifindra amin'ny alàlan'ny sekretera extracellular vesicle (EV).Na izany aza, ny molekiolan'ny molekiolan'ny duodenococcal EV (GEV) mifandraika amin'ny pathogen tafiditra amin'ity dingana ity sy ny anjara asan'ny inflammasome NLRP3 amin'ny giardiasis dia mbola hohazavaina.
Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy alpha-7.3 giardins ao amin'ny GEV dia naorina, nafindra tao amin'ny macrophages peritoneal voalohany amin'ny totozy, ary hita tamin'ny fandrefesana ny molekiola kendrena caspase-1.Ny haavon'ny fanehoana p20 dia voasivana..Ny G. duodenalis alpha-2 sy alpha-7.3 giardines dia fantatra tamin'ny voalohany tamin'ny fandrefesana ny inflammasome NLRP3 (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 ary caspase-1 p20), IL secretion.Ny haavon'ny 1β, ny haavon'ny oligomerization proteinina voapoizina (ASC), ary ny toerana misy ny immunofluorescent NLRP3 sy ASC.Ny anjara asan'ny inflammasome NLRP3 amin'ny pathogenicity an'ny G. duodenalis dia nodinihina tamin'ny fampiasana totozy izay nanakanana ny fampahavitrihana NLRP3 (NLRP3 voasakana totozy) ary ny fiovan'ny pathological amin'ny lanjan'ny vatana, ny enta-mavesatry ny parasitika duodenal, ary ny tavy duodenal.Ankoatra izany, dia nanadihady izahay raha ny hiardines alpha-2 sy alpha-7.3 dia mampirisika ny sekretera IL-1β ao amin'ny vivo amin'ny alàlan'ny inflammasome NLRP3 ary namaritra ny anjara asan'ireo molekiola ireo amin'ny pathogenicity ny G. duodenalis amin'ny totozy.
Alpha-2 sy alpha-7.3 giardines dia mandrisika ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 in vitro.Izany dia nitarika ny fampahavitrihana ny p20 caspase-1, ny fitomboan'ny haavon'ny fanehoana ny NLRP3, ny pro-IL-1β, ary ny proteinina pro-caspase-1, ny fitomboana lehibe amin'ny sekretera IL-1β, ny fananganana ASA ao amin'ny cytoplasm, ary ny induction ny ASA oligomerization.Ny fivontosana NLRP3 Ny fahaverezan'ny penile dia mampitombo ny pathogenicity ny G. duodenalis amin'ny totozy.Ny totozy tsaboina amin'ny kista amin'ny alàlan'ny gavage avy amin'ny totozy voasakana NLRP3 dia nampiseho fitomboan'ny isan'ny trophozoites sy fahasimbana mafy amin'ny villi duodenal, izay miavaka amin'ny crypts necrotic miaraka amin'ny fihenana sy rantsana.Ny fanandramana amin'ny vivo dia naneho fa ny giardines alpha-2 sy alpha-7.3 dia afaka mampirisika ny sekreteran'ny IL-1β amin'ny alàlan'ny inflammasome NLRP3, ary ny vaksiny amin'ny giardines alpha-2 sy alpha-7.3 dia mampihena ny pathogenicity ny G. duodenalis amin'ny totozy.
Raha ampifandraisina, ny valin'ity fanadihadiana ity dia manoro hevitra fa ny giardia alpha-2 sy alpha-7.3 dia miteraka fampivoarana ny areti-maso NLRP3 mpampiantrano ary mampihena ny fihanaky ny G. duodenalis amin'ny totozy, izay tanjona mampanantena amin'ny fisorohana ny giardiasis.
Giardia duodenum dia parasite protozoan extracellular izay miaina ao amin'ny tsina kely ary miteraka tranga 280 tapitrisa giardiasis miaraka amin'ny aretim-pivalanana isan-taona, indrindra amin'ny ankizy any amin'ny firenena an-dalam-pandrosoana [1].Ny olona dia voan'ny aretina amin'ny rano fisotro na sakafo voaloton'ny kista M. duodenum, izay miditra ao amin'ny vavony ary mivoaka amin'ny ranom-boankazo.Ny Giardia duodenum trophozoites dia miraikitra amin'ny epithélium duodenal, ka miteraka maloiloy, mandoa, aretim-pivalanana, fanaintainan'ny kibo, ary fihenan-danja.Ny olona manana immunodeficiency sy cystic fibrosis dia mora voan'ny aretina.Mety hitranga amin'ny alalan'ny firaisana am-bava sy anal ihany koa ny aretina [2].Ny zava-mahadomelina toy ny metronidazole, tinidazole, ary nitazoxanide no safidy fitsaboana tsara indrindra ho an'ny otrikaretina duodenal [3].Na izany aza, ireo fanafody chimiothérapie ireo dia miteraka voka-dratsy ratsy toy ny maloiloy, karsinôgôzôzy ary ny genotoxicity [4].Noho izany dia ilaina ny mamolavola paikady mahomby kokoa hisorohana ny aretina G. duodenalis.
Ny inflammasomes dia kilasin'ny proteinina cytosolic complexes izay ampahany amin'ny valin-kafatra voajanahary voajanahary, manampy amin'ny fiarovana amin'ny fanafihan'ny pathogen ary manelanelana ny valin'ny mamaivay [5].Amin'ireo inflammasomes ireo, ny nucleotide-binding oligomerization (NOD) receptor 3 (NLRP3) nucleotide-binding oligomerization (NLRP3) nucleotide-binding-like inflammasome dia nodinihina lalina satria azo tsikaritra amin'ny karazana molekiola / molekiola mifandraika amin'ny fahasimbana (PAMP). DAMP), manaiky, manetsika ny hery fiarovana voajanahary.ary mandrindra ny homeostasis tsinay amin'ny aretina mamaivay maro [6,7,8].Izy io dia ahitana ny receptor recognition (PRR) NLRP3, ny proteinina apoptika (ASC), ary ny procaspase-1 na procaspase-11.Ny inflammasome NLRP3 dia miasa ho toy ny mpampiantrano manohitra ny fanafihana pathogen, araka ny hita ao amin'ny Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], ary Leishmania fianarana.[11], saingy voalaza ihany koa fa ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 dia mametra ny valin'ny fiarovana fiarovana ary mampitombo ny fivoaran'ny aretina, ohatra, amin'ny kankana [12].Miorina amin'ny fikarohana nataontsika teo aloha, dia nitatitra izahay fa ny G. duodenalis extracellular dia miteraka fampidiran-drivotra ao amin'ny NLRP3 ary manova ny valin'ny areti-mifindra amin'ny alàlan'ny fanafenana vesicles extracellular (EVs) [13].Na izany aza, ny anjara asan'ny inflammasome NLRP3 amin'ny aretina G. duodenalis ao amin'ny vivo dia mbola tsy maintsy voafaritra.
Ny Giardins dia nofaritana tany am-boalohany ho singa ara-drafitra ao amin'ny cytoskeleton G. duodenalis ary mitana anjara toerana lehibe amin'ny motility trophozoite sy ny fidiran'ny sela epithelial ao amin'ny tsina kely.Mba hifanaraka tsara kokoa amin'ny tontolo iainana sy hampitombo ny pathogenité, ny G. duodenalis trophozoites dia namolavola rafitra cytoskeletal tokana ahitana flagella 8, vatana afovoany 1 ary disc ventral 1 [14].Ny trophozoites an'ny Giardia duodenum dia mampiasa ny cytoskeleton-ny mba hidirana amin'ny tsinay kely ambony, indrindra ny duodenum, ary miraikitra amin'ny enterocytes.Mifindra monina tsy tapaka izy ireo ary mifamatotra amin'ny sela epithelial amin'ny fampiasana metabolisma sela.Noho izany, misy fifandraisana akaiky eo amin'ny cytoskeleton sy ny virulence.Ny giardines manokana ho an'ny Giardia duodenum dia singa ao amin'ny rafitra cytoskeleton [15] ary mizara ho kilasy efatra: α-, β-, γ-, ary δ-giardines.Misy mpikambana 21 ao amin'ny fianakaviana α-giardina, izay samy manana ny fahaiza-manaon'ny calcium amin'ny famatorana phospholipids [16].Izy ireo koa dia mampifandray ny cytoskeleton amin'ny membrane sela.Ao amin'ny olona voan'ny aretim-pivalanana vokatry ny G. duodenalis, ny α-giardins dia tena mibaribary sy immunoreactive mandritra ny aretina [17].Ny vaksiny heterologous mifototra amin'ny Giardia alfa-1 dia miaro amin'ny giardiasis amin'ny totozy ary mety ho antigène kandidà ho an'ny fampandrosoana vaksiny [18].Alpha-8 giardin, eo an-toerana ao amin'ny membrane plasma sy flagella, fa tsy ao amin'ny disc ventral, dia manatsara ny motility sy ny fitomboan'ny trophozoites ao amin'ny G. duodenalis [19].Alpha-14 giardin dia miraikitra amin'ny rafitra microtubule amin'ny flagella ary misy fiantraikany amin'ny fahafahan'ny G. duodenalis [20].Ny Alpha-11 giardine dia misy be dia be mandritra ny androm-piainan'ny fiainana, ary ny overexpression ny alpha-11 giardine dia manimba ny G. duodenalis mihitsy [21].Na izany aza, tsy fantatra raha ny alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine dia miaro amin'ny aretina G. duodenalis sy ny rafitra fototra.
Ao anatin'ity fandalinana ity, ny plasmids fanehoana eukaryotic recombinant pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine sy pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine dia nafindra tao amin'ny macrophages peritoneal voalohany amin'ny totozy mba hampavitrika ny host NLRP3.Nojerena avy eo ireo lasibatra mamaivay.Nodinihinay ihany koa ny andraikitry ny inflammasome NLRP3 amin'ny pathogenicity an'ny G. duodenalis, nanadihady raha ny alpha-2 sy alpha-7,3 giardines dia mandrisika ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 amin'ny vivo, ary nanapa-kevitra fa ireo anjara roa amin'ny giardines amin'ny pathogenicity ny G. duodenalis.Ny tanjonay iraisana dia ny hampivelatra tanjona mampanantena ny fisorohana ny aretina G. duodenalis.
Ny karazana bibidia (WT) C57BL/6 totozy vavy 5-8 herinandro dia novidina tao amin'ny Liaoning Changsheng Experimental Animal Center (Liaoning, Shina).Nahazo rano maimaim-poana ny totozy, nahazo sakafo sterilized ary notazonina tao anatin'ny tsingerin'ny hazavana / maizina 12/12 ora.Talohan'ny otrikaretina, ny totozy dia nahazo antibiotika ad libitum amin'ny rano fisotro nampiana ampicillin (1 mg / mL), vancomycin (1 mg / mL), ary neomycin (1.4 mg / mL) (voavidy avy any Shanghai, Shina, zavamananaina artifisialy) [22]. ].].Ny totozy izay tsy afaka nihinana sy nisotro nandritra ny> 24 ora ary very ≥ 20% ny lanjan'ny vatana dia nesorina tamin'ny alàlan'ny fifindran'ny vozon-tranonjaza.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, Etazonia) dia nampiana 12,5% ​​serum foetal bovine (FBS; Every Green, Zhejiang, China) ary 0,1% bovine bile (Sigma-Aldrich, St. Missouri, Etazonia). ).Etazonia) eo ambanin'ny fepetra microaerobic.Ny trophozoites confluent dia nangonina teo amin'ny gilasy ary nandalo tamin'ny tahan'ny 1: 4 ho an'ny famokarana bebe kokoa.
Ny kista Giardia duodenum dia nopotehina araka ny voalaza teo aloha [23], ny trophozoites dia nojinjaina tamin'ny dingana logarithmic ary avy eo nopotehina tamin'ny encapsulation inducing medium, pH 7.1 (novaina TYI-S-33) amin'ny fifantohana farany amin'ny 1 × 106 trophozoites / mL.fatran'ny bile 0,05% antonony).Ny trophozoites dia nokolokoloina tao anatin'ny toe-javatra anaerobic amin'ny 37 ° C mandra-pahatongan'ny dingana fitomboana logaritma.Ovay ny medium ho an'ny cyst inducing medium (pH 7.8; modified TYI-S-33 medium amin'ny 1% bile concentration) ary ny kolontsaina G. duodenalis amin'ny 37 ° C mandritra ny 48-96 ora, izay nahitana ny cysts formation teo ambany mikraoskaopy.Taorian'ny nahatonga ny ankamaroan'ny trophozoites ho kista, ny fangaro kolontsaina dia nojinjaina ary naverina naverina tamin'ny rano deionized sterile mba hanesorana ny trophozoite sisa.Noisaina ny kista ary notehirizina tao amin'ny 4 ° C ho an'ny fanadihadiana manaraka amin'ny alàlan'ny fantsona gastric amin'ny totozy.
Giardia extracellular vesicles (GEVs) dia nanankarena araka ny voalaza teo aloha [13].Ny trophozoites amin'ny dingana fitomboan'ny logarithmic dia naverina tamin'ny alàlan'ny TYI-S-33 novaina izay nomanina tamin'ny FBS (Industries Biolojika, Beit-Haemek, Israel) ho amin'ny fifantohana farany amin'ny parasites 1 × 106 / mL ary natsipy nandritra ny 12 ora.Notokanana tamin'ny supernatant kolontsaina tamin'ny alalan'ny centrifugation amin'ny 2000 g mandritra ny 10 min, 10,000 g mandritra ny 45 min, ary 100,000 g mandritra ny 60 min.Ny precipitates dia levona ao amin'ny phosphate buffered saline (PBS), nofaritana tamin'ny fampiasana kitapom-panadinana proteinina BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Etazonia) ary voatahiry ao amin'ny -80 ° C. na ampiasaina mivantana amin'ny famakafakana fanampiny.
Ny macrophages peritoneal totozy voalohany dia nomanina araka ny voalaza teo aloha [24].Raha fohifohy, ny totozy (taona 6-8 herinandro) dia nampidirina (intraperitoneally [ip]) miaraka amin'ny 2.5 ml ny 2.98% Difco liquid thioglycol medium (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) ary nanome sakafo 3-4 palates.Ny fampiatoana ny macrophages dia nangonina avy amin'ny lava-kibon'ny totozy taorian'ny euthanasie ary nopetahana in-3 tamin'ny 1000 g nandritra ny 10 min.Ny sela voaangona dia hita tamin'ny alàlan'ny cytometry mikoriana amin'ny fampiasana marika CD11b mandra-pahatongan'ny fahadiovan'ny sela dia> 98%, avy eo ampidirina amin'ny takelaka kolontsaina sela 6-well (4.5 x 106 sela / fantsakana) ary asiana 10% FBS (Bioindustrie) amin'ny 37 ° C.ary 5% CO2.
Ny ARN dia nalaina avy amin'ny trophozoites 1 × 107 ao amin'ny 1 ml ny TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, Shina), ny ADN génomika dia nalaina avy amin'ny totalin'ny G. duodenalis RNA mampiasa MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, Shina) ary ny ADN mifameno (cDNA) dia novolavolaina. mampiasa MonScript RTIII Super Mix (Monad) araka ny torolalan'ny mpanamboatra.
Ny fampahalalana momba ny filaharan'ny CDS ho an'ny kendrena G. duodenalis dia azo avy amin'ny NCBI GenBank.Mampiasà Primer 5.0 mba handrafetana ny fototarazony manokana ho an'ny fototarazo kendrena tsirairay.Ny primer mandroso (5′-3′) dia misy fizarana telo: filaharana mifanindry miaraka amin'ny pcDNA3.1(+) fizika tsipika tsipika pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTTCTGCAGAT) ary manomboka kodon ATG sy GNN (raha tsy G ny fototra voalohany).Izany dia atao mba hanatsarana ny fahombiazan'ny fitenenana.Fanampin'izany, farafahakeliny 16 bp mitambatra fototra (GC votoaty 40–60%/Tm eo ho eo 55 °C).Ny primer mifamadika (5′-3′) dia misy ampahany roa, filaharana mifanindry miaraka amin'ny vector pcDNA3.1(+) misy tsipika EcoRV (+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ary fototra mitambatra farafahakeliny 16 bp.(ankoatra ny fijanonana roa farany).bases) codon toy ny AA na GA mba ahafahan'ny plasmids recombinant haneho ny proteinina misy marika).Ny filaharana voalohany dia voatanisa ao amin'ny tabilao 1 ary novolavolain'ny Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Changchun, Shina).
Ny tanjona dia nohamafisina tamin'ny alàlan'ny Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, China) na Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, Shina) tamin'ny fampiasana G. duodenalis cDNA voaomana ho modely.Ny eukaryotic expression vector plasmid pcDNA3.1 (+) dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny famerana anzima EcoRV ary dephosphorylated amin'ny alàlan'ny Fast AP (Thermo Fisher Scientific).Ny sombintsombiny pcDNA3.1 (+) linearized sy ny sombin-taranaka kendrena nohamafisina dia nodiovina tamin'ny alàlan'ny kitapo fanadiovana gel ADN (Tiangen) ary nohamarinina tamin'ny alàlan'ny Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific).Ny sombiny pcDNA3.1(+) sy ny sombin'ny fototarazo kendrena tsirairay dia natambatra indray tamin'ny fampiasana MonClone single assembly cloning mix (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, Shina) ary nohamafisin'ny ADN sequencing mampiasa Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China)..
Ny plasmids tsy misy endotoxine pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 dia novokarina tamin'ny fampiasana ny SanPrep Endotoxin tsy misy Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech).Ny fifantohana dia nitazona mihoatra ny 500 ng / µl mba hahazoana antoka fa ny EDTA ao amin'ny buffer elution dia tsy manelingelina ny fitiliana transfection.Ny macrophages peritoneal totozy Kilonga dia nokolokoloina tamin'ny takelaka 6-lavaka misy RPMI 1640 feno (Industries Biolojika) mandritra ny 12 ora, avy eo ny sela dia nosasana in-3 tamin'ny PBS mafana mba hanesorana penicillin sy streptomycin, ary avy eo amin'ny mpanelanelana amin'ny famenoana feno.Ny plasmids tsy misy endotoxine pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 (2.5 μg) dia nopotehina tamin'ny 125 μl an'ny Opti-MEM nihena serum medium (Gibco, Thermo Fisher Scientific)..Avy eo 5 µl Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) dia natsofoka tamin'ny 125 µl amin'ny medium Opti-MEM serum ambany.Manomàna complexes liposome-ADN amin'ny fampifangaroana ny plasmid tsy misy endotoxine voapoizina miaraka amin'ny Lipofectamine 2000 ary avelao hijanona amin'ny mari-pana mandritra ny 5 minitra ilay fangaro.Alefaso misaraka amin'ny sela ao anaty lavadrano tsirairay ny complexes ary afangaro tsikelikely.Rehefa afaka 4 ora, dia nosoloina 2 ml ny medium RPMI 1640 feno ny kolontsaina sela ary nitohy nandritra ny 24 ora ny kolontsaina.Nampidirina tao amin'ny sela ny fitaovam-pambolena sela vaovao ary natsofoka nandritra ny fotoana samihafa arakaraka ny famolavolana fitiliana.
Ny santionan'ny proteinina avy amin'ny supernatant sy ny lysate sela dia nomanina araka ny voalaza teo aloha [25].Ny mari-pamantarana famindrana membrane ho an'ny pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, ary ny His-tag dia 200 mA / 90 min.Ho an'ny interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Etazonia), caspase-1 (p20) (Adipogen, Soisa) ary NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) ary 1: 5000 mikendry ny teniny (Amylet Scientific, Wuhan, Sina) ary β-actin (Proteintech, Wuhan, Shina).
Ny fifamatorana amin'ny disuccinimide suberate (DSS) dia natao araka ny voalaza teo aloha [26].Ny sela dia nosasana in-3 tamin'ny PBS mangatsiaka ary nodiovina tanteraka tamin'ny fanjaitra 27 gauge tao amin'ny 50 µl ASC reaction buffer (pH 8.0) misy 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ary 125 mM NaHCO3.Ny fangaro dia natao centrifuged tamin'ny 5000 g nandritra ny 3 min ary ny pellet dia nopetahana tamin'ny 10 µl DSS (25 mM in DMSO) ary 40 µl ASC reaction buffer nandritra ny 30 min tamin'ny 37 ° C.Taorian'ny centrifugation amin'ny 5000 g mandritra ny 10 minitra, ny pellet dia levona amin'ny vahaolana 40 µl ASC reaction buffer sy 10 µl of 6x protein loading buffer (TransGen, Beijing, China), ary avy eo ny vahaolana dia nesorina tao amin'ny mari-pana amin'ny 15. min., Andrahoina 10 minitra avy eo.Ny santionan'ny proteinina avy eo dia iharan'ny famonoan'ny tandrefana amin'ny fampiasana antibody anti-ASC voalohany (Wanleibio, Shenyang, Shina) amin'ny tahan'ny dilution 1: 500.
Taorian'ny dingana efa voalaza teo aloha [13], dia nojinjaina ny supernatants kolontsaina sela ary ny sekreteran'ny cytokine pro-inflammatoire IL-1β dia nofaritana tamin'ny fampiasana ny totozy IL-1 Beta ELISA kit (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific).Ampifamadiho ny sanda OD450nm amin'ny fifantohana proteinina amin'ny alàlan'ny curve mahazatra IL-1β.
Ny sela voarakotra amin'ny coverlips dia nosasana moramora in-3 tamin'ny PBS mafana, napetraka tao amin'ny cellule cellule fixative (Biosharp, Beijing, China) nandritra ny 10 min amin'ny mari-pana amin'ny efitrano (RT), ao amin'ny 0.1% Triton X-Permeabilize amin'ny 100 (voatoto ao amin'ny PBS; Biosharp ) mandritra ny 20 minitra amin'ny mari-pana amin'ny efitrano ary sakanana amin'ny albumin serum bovine 5% (ao amin'ny PBS) mandritra ny 2 ora amin'ny mari-pana.Ny sela dia natsipy nandritra ny alina tao amin'ny 4 ° C miaraka amin'ny antibody voalohany amin'ny ASC (1: 100 dilution) na NLRP3 (1: 100 dilution), ary ny Cy3 misy marika anti-bitro IgG (H + L) (1: 400; EarthOx). , San Francisco, CA, Etazonia) na FITC-conjugated goat anti-mouse IgG (1:400; Earthox) mandritra ny alina amin'ny 37°C ao anaty haizina mandritra ny adiny 1.Ny nuclei dia nolokoina tamin'ny Hoechst 33258 (10 μg / ml; UE, Suzhou, Shina) nandritra ny 5 minitra ary nojerena teo ambanin'ny microscope fluorescence (Olympus Corporation, Tokyo, Japana).
Nozaraina ho vondrona efatra ny totozy (n = 7 isaky ny vondrona): (i) Vondrona fanaraha-maso ratsy tsaboina amin'ny PBS (PBS ihany; gavage 100 µl/mouse PBS arahin'ny tsindrona intraperitoneal isan'andro 100 µl/mouse PBS 3 ora aty aoriana)., mitohy mandritra ny 7 andro);(ii) vondrona fanaraha-maso ratsy tsaboina amin'ny MCC950 inhibitor [27] (100 µl / totozy amin'ny alàlan'ny PBS gavage, ora 3 taty aoriana, 10 mg / kg lanjan'ny vatana [BW] MCC950 [amin'ny PBS] dia nomena intraperitoneally isan'andro, maharitra 7 andro);(iii) G. duodenalis cyst infection groupe (1.5 x 106 kista / totozy amin'ny gavage, 3 ora taty aoriana, 100 μl / totozy PBS intraperitoneally itantanana isan'andro mandritra ny 7 andro);(iv) G. duodenalis kista mitambatra vondrona aretina MCC950 inhibitor vondrona fitsaboana (1.5 × 106 kista / totozy amin'ny alalan'ny gavage, 10mg/kg lanjan'ny vatana MCC950 intraperitoneally isan'andro mandritra ny 7 andro amin'ny 3h).Ny lanjan'ny totozy tsirairay dia naraha-maso isan'andro ary ny totozy rehetra dia nesorina tamin'ny andro faha-7.Ny duodenum voaangona (3 sm ny halavany) dia notapatapahina kely tao amin'ny 1 ml PBS, ny cysts dia nopotehina nandritra ny alina tao amin'ny PBS tamin'ny 4 ° C, ary G. duodenalis trophozoites.Ny duodenum vaovao (1 sm ny halavany) dia natokana ho an'ny fandokoana hematoxylin sy eosin (H&E).
Ny totozy dia nizara ho vondrona roa: (i) MOCK control group ary (ii) MCC950 inhibitor group.Nisy fitsaboana dimy tao amin'ny vondrona tsirairay (n = 7 / vondrona fitsaboana): (i) PBS fitsaboana vondrona fanaraha-maso ratsy (PBS ihany; 100 µl / totozy PBS, intramuscular (IM) tsindrona (tibialis anterior) [28, 29];( ii) pcDNA3.1(+) plasmid negative control group (100 µg/mouse ADN, via intramuscular tsindrona) (iii) G. duodenalis cyst infection control positive group (1.5 x 106 cysts/mouse, via gavage) (iv) a vondrona tsaboina amin'ny plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-2 (100 μg / totozy ADN, amin'ny tsindrona intramuscular), ary (v) vondrona tsaboina amin'ny plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 (100 μg / totozy ADN, taorian'ny ora 12 nandalo, ny totozy ao amin'ny vondrona inhibitor MCC950 dia nahazo tsindrona intraperitoneal isan'andro amin'ny MCC950 (10 mg / kg lanjan'ny vatana) nandritra ny 7 andro, raha ny totozy ao amin'ny vondrona MOCK dia nahazo ny habetsaky ny fitsaboana PBS. Nangonina avy amin'ny totozy eyeballs ary navela nandritra ny alina tao amin'ny 4 ° C ny santionany Serum dia natokana tamin'ny fampiasana enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) sy ny fandrefesana ny haavon'ny IL-1β.
Nozaraina ho vondrona dimy ny totozy dimy amby telopolo (n=7/group).Ny vondrona 1 dia vondrona fanaraha-maso ratsy tsaboina amin'ny PBS: nahazo 100 μl ny PBS intramuscularly ny totozy ary 3 andro taty aoriana tamin'ny gavage.Ny vondrona 2 dia vondrona fanaraha-maso tsara voan'ny kista G. duodenalis: ny totozy dia nampidirina tamin'ny 100 μl PBS, ary 3 andro taty aoriana dia nampidirina intragastrically ny 1.5 x 106 kista / totozy.Vondrona fahatelo - vaksinin'ny plasmid miaraka amin'ny pcDNA3.1 (+) miaraka amin'ny vondrona fanaraha-maso ho an'ny otrikaretina kista duodenal: ny totozy dia nahazo 100 μg ny ADN plasmid pcDNA3.1 (+) (im) am-bava, 1.5 × 106 kista / totozy 3 ho an'ny maromaro andro.Ny vondrona 4 sy 5 dia recombinant pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine plasmid na pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine plasmid miaraka amin'ny G. duodenalis cyst infection.Vondrona fanandramana: nahazo 100 µg ny pcDNA3 ny totozy.1 (+)-giardine plasmid ADN (im), avy eo 3 andro taty aoriana, 1.5 × 106 kista / totozy dia natsindrona tamin'ny gavage.Ny lanjan'ny totozy tsirairay dia nanara-maso taorian'ny fampidirana ny kista G. duodenalis amin'ny alalan'ny fantsona.Ny duodenum vaovao dia nangonina ho an'ny fandrefesana ny enta-mavesatry ny parasitika sy ny famakafakana fandokoana HE.
Ny fiovan'ny histopathological dia nodinihina araka ny fomba fiasa efa navoaka teo aloha [30].Ny duodenum vaovao dia raikitra tamin'ny fixative sela sela, napetaka tamin'ny paraffin, notapatapahina tamin'ny fizarana 4 μm, nolokoina tamin'ny H&E ary nodinihina teo ambanin'ny mikraoskaopy maivana.Ny fiovan'ny pathological solontenan'ny fizarana sela fito avy amin'ny totozy tsy miankina fito dia nodinihan'ny pathologist iray tsy nahalala ny fitsaboana ary voasambotra tamin'ny 200x magnification.Ny halavan'ny villi sy ny halalin'ny crypts dia norefesina araka ny fomba voalaza teo aloha.
Ny vokatra in vitro sy in vivo dia azo tamin'ny triplicate.Ny sary dia noforonina tamin'ny fampiasana GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, Etazonia).Ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona roa dia nodinihina tamin'ny t-test, raha ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona ≥3 dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny famakafakana ny variana tokana (ANOVA) tamin'ny fampiasana rindrambaiko SPSS (version 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).Ny angon-drakitra dia nodinihina ho an'ny homogeneity of variance amin'ny fampiasana ny fitsapana Levene arahin'ny fitsapana post hoc Bonferroni (B).Ny dikany dia aseho amin'ny P <0.05, P <0.01, ary P <0.001 (tsy manan-danja [ns]) (P> 0.05).
Ny famakafakana teo aloha momba ny proteomika GEV ao amin'ny Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) dia nampiseho fa maro ny tanjona mety ho tafiditra amin'ny fampahavitrihana ny lalan'ny famantarana famantarana [13].Nifidy tanjona roa nampanantenaina izahay, alpha-2 sy alpha-7.3 giardins, manamafy ireo molekiola ireo ary mampiasa azy ireo hanamboarana ny pcDNA3.1 (+) eukaryotic expression vector.Taorian'ny filaharana, ny recombinant pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy alpha-7.3 giardine expression plasmids dia nafindra tao amin'ny macrophages peritoneal totozy voalohany, ary ny proteinina famantarana ny caspase-1 p20 amin'ny areti-maso (sombiny amin'ny caspase-1 mavitrika) dia fantatra. toy ny manazava ny molekiola fototra izay mety hiteraka areti-maso.Ny valiny dia naneho fa ny alpha-2 sy alpha-7.3 giardines dia afaka miteraka p20 caspase-1 mitovitovy amin'ny GEV.Tsy misy fiantraikany amin'ny fampahavitrihana caspase-1 hita ao amin'ny fanaraha-maso ratsy tsy voatsabo (PBS ihany) sy ny fanaraha-maso plasmid pcDNA3.1 (+) (sary 1).
Fandrefesana ny fampahavitrihana p20 caspase-1 amin'ny pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy alpha-7.3 giardins.Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy alpha-7.3 giardines (eo ambonin'ny lalana tsirairay) dia nafindra tany amin'ny macrophages peritoneal totozy voalohany ary ny supernatants kolontsaina dia nojinjaina 24 ora taty aoriana.Ny famafazana tandrefana dia nampiasaina mba handrefesana ny haavon'ny fanehoana ny proteinina inflammasome caspase-1 p20 sonia.Ny vondrona fitsaboana PBS irery (lane C) sy ny vondrona monotherapy pcDNA3.1 (+) (pcDNA3.1 lane) dia nampiasaina ho fanaraha-maso ratsy, ary ny vondrona fitsaboana GEV dia nampiasaina ho fanaraha-maso tsara.Ny fanehoana ny proteinina recombinant dia nohamafisina tamin'ny fahitana marika histidine ao amin'ny proteinina tsirairay, ary ny tarika proteinina andrasana dia alpha-2 giardine (38.2 kDa) sy alpha-7.3 giardine (37.2 kDa).GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-linearized vector, SUP, supernatant
Mba hamaritana raha ny alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine dia mampirisika ny p20 caspase-1 fanehoana ary mitana anjara toerana amin'ny fampandehanana ny valin'ny inflammatory NLRP3 mpampiantrano, pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine ary pcDNA3.1 (+) -alpha -7.3 giardin dia nafindra tao amin'ny macrophages peritoneal totozy voalohany miaraka amin'ny ADN plasmid recombinant, ary ny haavon'ny fitenenana, ny localization ary ny oligomerization ny proteinina inflammatoire NLRP3 dia voafaritra.Ao anatin'ity fanandramana ity, ny GEV dia nampiasaina ho vondrona fanaraha-maso tsara, ary ny vondrona tsy misy fitsaboana (PBS ihany) na ny vondrona fitsaboana transfection pcDNA3.1 (+) dia ny vondrona ratsy.Ny valiny dia naneho fa, toy ny ao amin'ny vondrona GEV, ny ADN plasmid recombinant an'ny giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 sy giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 dia nahatonga ny fanavaozana ny NLRP3, pro-IL-1β ary procaspase-1 sy caspase-1 fampahavitrihana (sary 2a).Ankoatra izany, ny giardines roa dia nahatonga ny sekretera IL-1β manan-danja (pcDNA3.1: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0007 ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1,625, P = 0,0047) (sary 2b).Ny ankamaroan'ny proteinina ASC dia monomeric ao amin'ny vondrona tsy misy fitsaboana na ao amin'ny vondrona fitsaboana nafindra tamin'ny pcDNA3.1 (+) plasmid, mifanohitra amin'ny pcDNA3.1 (+) -alpha-2 na pcDNA3.1 (+) -alpha- 7.3 giardina.Ny oligomerization ASC dia nitranga tao amin'ny ADN plasmid recombinant an'ny vondrona na vondrona fanaraha-maso tsara GEV, izay mampiseho endrika oligomeric (sary 2c).Ireo angon-drakitra mialoha ireo dia manoro hevitra fa ny alpha-2 giardine sy alpha-7,3 giardine dia afaka mampirisika ny fampidiran-drivotra NLRP3.Ny fandalinana immunofluorescent taorian'izay momba ny toerana misy ny ASC sy ny NLRP3 dia nampiseho fa tao amin'ny vondrona fanaraha-maso ratsy, ny proteinina ASC dia niparitaka nanerana ny cytoplasma ary niseho ho toy ny teboka famantarana amin'ny fanentanana ny pcDNA3.1 (+) -alpha-2 miaraka amin'ny giardine na pcDNA3.1 (+) -alpha-7,3 vondrona giardine na vondrona fanaraha-maso tsara GEV (sary 2d).Ao amin'ny fanaraha-maso ratsy sy ny vondrona pcDNA 3.1 voatsabo amin'ny plasmid, dia tsy hita ny famantarana proteinina NLRP3, raha misy teboka famantarana fluorescent ho valin'ny pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine na pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 dia hita..Ny giardine dia hita ao amin'ny cytoplasm na amin'ny fanentanana ny HEV (sary 2e).Ireo angon-drakitra ireo dia mampiseho fa ny G. duodenalis giardin alpha-2 sy giardin alpha-7.3 dia manetsika ny inflammasome NLRP3 amin'ny macrophages peritoneal voalohany amin'ny totozy.
pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardin sy pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardin dia manetsika ny inflammasome NLRP3 amin'ny macrophages peritoneal totozy.Mamindra ny recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardin sy pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardin ho any amin'ny macrophages peritoneal murine voalohany sy ny sela, na mijinja ny supernatant ao anatin'ny 24 ora ho an'ny fanadihadiana ny fanehoana, oligomerization , miafina.ary ny toerana misy ny proteinina inflammatoire lehibe.Ny vondrona PBS-only (C) sy ny vondrona fitsaboana tokana pcDNA3.1 (+) dia nampiasaina ho fanaraha-maso ratsy, ary ny vondrona fitsaboana GEV dia nampiasaina ho vondrona tsara.Ny proteinina inflammatoire lehibe NLRP3, anisan'izany ny NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1, ary p20 caspase-1, dia hitan'ny Western blotting.b Ny haavon'ny sekreteran'ny IL-1β ao amin'ny supernatants dia nofaritana tamin'ny fampiasana enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona fanaraha-maso sy andrana dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny fanadihadiana iray momba ny variana (ANOVA) tamin'ny fampiasana rindrambaiko SPSS version 22.0.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe eo amin'ny vondrona ** P <0.01 sy *** P <0.001.c Ny haavon'ny oligomerization ASC amin'ny pellets dia nofaritana tamin'ny famakafakana fifandraisana DSS, raha ny haavon'ny ASC amin'ny lysate sela dia nampiasaina ho fanaraha-maso ny entana.d Visualization ny localization ISC mampiasa immunofluorescence.e Immunofluorescence dia nampiasaina mba hijerena ny toerana misy ny NLRP3.ASC, apoptotic speck-toy ny proteinina;IL, interleukin;NLRP3, nucleotide-binding oligomerization-like receptor 3;ns, tsy manan-danja (P> 0,05)
Na ny G. duodenalis sy ny GEV apetrany dia manetsika ny inflammasome NLRP3 ary mandrindra ny valin'ny inflammatory host in vitro.Noho izany, ny anjara asan'ny inflammasome NLRP3 amin'ny pathogenicity ny G. duodenalis dia mbola tsy mazava.Mba hanadihadiana an'io olana io, dia nanamboatra fanandramana teo amin'ny totozy voan'ny G. duodenalis cyst sy ny totozy voan'ny G. duodenalis cyst + MCC950 fitsaboana inhibitory izahay ary nampitaha ny fitenenana inflammasome NLRP3 rehefa voan'ny cyst G. duodenalis.Ny drafitra amin'ny antsipiriany momba ny fanandramana dia aseho amin'ny sary 3a.Ny fiovan'ny lanjan'ny totozy amin'ny vondrona fitsaboana samihafa dia naraha-maso nandritra ny 7 andro taorian'ny aretina amin'ny cysts, ary ny valiny dia aseho amin'ny sary 3b.Raha ampitahaina amin'ny vondrona tsaboina amin'ny PBS madio, ny valiny dia mampiseho fa (i) ny lanjan'ny totozy voan'ny G. duodenalis cyst dia nihena nanomboka tamin'ny andro 3 ka hatramin'ny andro 7 taorian'ny aretina;(ii) ny fitsaboana miaraka amin'ny inhibitor MCC950 dia tsy nisy fiantraikany lehibe teo amin'ny lanjan'ny totozy..Raha ampitahaina amin'ny vondrona otrikaretina tokana, ny BW an'ny vondrona otrikaretina duodenal tsaboina amin'ny MCC950 dia nihena ho isan-karazany (Andro 1: ANOVA, F (3, 24) = 1.885, P = 0.0148; Andro 2: ANOVA, F (3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001; Andro 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; (3, 24)=0,6497, P=0,0645; Andro 6: ANOVA, F(3, 24)=5,457, P=0,0175;Ireo angon-drakitra ireo dia mampiseho fa ny inflammasome NLRP3 dia miaro ny totozy amin'ny fihenan-danja lehibe amin'ny dingana voalohany (2-4 andro) amin'ny otrikaretina duodenal.Avy eo dia nikendry ny hamantatra ny G. duodenalis trophozoites amin'ny fluid lavage duodenal izahay ary ny valiny dia aseho amin'ny sary 3c.Raha ampitahaina amin'ny vondrona G. duodenalis cyst infection, dia nitombo be ny isan'ny trophozoites ao amin'ny duodenum taorian'ny fanakanana ny inflammasome NLRP3 (t (12) = 2.902, P = 0.0133).Ny tasy duodenal voapoizina amin'ny HE dia nampiseho, raha oharina amin'ny fanaraha-maso ratsy tsaboina amin'ny PBS sy MCC950 irery: ​​(i) G. duodenalis cyst infection dia niteraka fahasimbana tamin'ny villi duodenal (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0488 ) ary atrophy crypt (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) duodenum avy amin'ny totozy voan'ny kista G. duodenalis ary tsaboina amin'ny inhibitor MCC950.Ny villi duodenal dia simba ary maty (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) miaraka amin'ny atrophy sy crypt branching (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (sary 3d- f).Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny inflammasome NLRP3 dia manana anjara toerana amin'ny fampihenana ny pathogenicity ny G. duodenalis.
Ny anjara asan'ny inflammasome NLRP3 amin'ny aretina Giardia duodenum.Ny totozy dia nalaina (iv) miaraka amin'ny kista duodenococcal ary avy eo notsaboina miaraka amin'ny MCC950 (ip) na tsy misy.Ny vondrona fitsaboana tokana miaraka amin'ny PBS na MCC950 dia nampiasaina ho fanaraha-maso.Vondrona andrana sy fomba fitsaboana.b Ny lanjan'ny totozy isaky ny vondrona fitsaboana isan-karazany dia naraha-maso nandritra ny 7 andro.Ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona otrikaretina G. duodenalis sy ny vondrona fitsaboana aretina G. duodenalis + MCC950 dia nodinihina tamin'ny t-test tamin'ny fampiasana rindrambaiko SPSS version 22.0.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe amin'ny * P <0.05, ** P <0.01, na *** P <0.001.c Ny enta-mavesatry ny parasitika dia nofaritana tamin'ny fanisana ny isan'ny trophozoites ao amin'ny fluid lavage duodenal.Ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona otrikaretina G. duodenalis sy ny vondrona fitsaboana aretina G. duodenalis + MCC950 dia nodinihina tamin'ny t-test tamin'ny fampiasana rindrambaiko SPSS version 22.0.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe amin'ny * P <0.05.d Hematoxylin sy eosin (H&E) vokatry ny fandotoana ny duodenal histopathology.Ny zana-tsipìka mena dia manondro ny fahasimban'ny villi, ny zana-tsipìka maitso dia manondro ny fahasimban'ny crypts.Haavony: 100 µm.e, f Famakafakana statistika ny haavon'ny villus duodenal sy ny haavon'ny totozy.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe amin'ny * P <0.05 sy ** P <0.01.Ny vokatra dia nalaina tamin'ny fanandramana biolojika tsy miankina 7.BW, lanjan'ny vatana;ig, lalana fanaterana intragastric;ip, lalana fanaterana intraperitoneal;ns, tsy manan-danja (P> 0,05);PBS, phosphate buffered saline;WT, karazana wild
Ny sekreteran'ny IL-1β dia mariky ny fampahavitrihana ny areti-maso.Mba hamaritana raha ny G. duodenalis alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine dia manetsika ny NLRP3 host inflammasome in vivo, dia nampiasa totozy WT tsy voatsabo (sham group) sy NLRP3 inflammasome-blocked mice (MCC950 inhibited treatment group).Ny drafitra amin'ny antsipiriany momba ny fanandramana dia aseho amin'ny sary 4a.Ny vondrona fanandramana dia nahitana totozy tsaboina amin'ny PBS, G. duodenalis cyst fitsaboana amin'ny gavage, intramuscular tsindrona pcDNA3.1, ary intramuscular tsindrona pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine na pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine.Tamin'ny andro faha-7 taorian'ny fitantanana intramuscular ny plasmid recombinant, dia nangonina ny serum ary voafaritra ny haavon'ny IL-1β amin'ny vondrona tsirairay.Araka ny asehon'ny sary 4b, ao amin'ny vondrona MOCK: (i) raha oharina amin'ny vondrona PBS, ny fitsaboana pcDNA3.1 dia tsy nisy fiantraikany lehibe teo amin'ny sekretera IL-1β (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998), na izany aza, Ny sekretera IL-β dia nitombo be tao amin'ny vondrona G. duodenalis cyst (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine sy pcDNA3.1- Ny tsindrona intramuscular ny alpha-7.3 giardine dia nitombo be ny serum IL-1β (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P <0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine dia nahatonga ny haavon'ny IL-1β avo lenta amin'ny pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .Raha ampitahaina amin'ny vondrona tsirairay ao amin'ny vondrona fitsaboana MCC950 sy ny vondrona MOCK: (i) Ny haavon'ny sekretera IL-1β ao amin'ny vondrona fanaraha-maso PBS sy ny vondrona mpanara-maso pcDNA3.1 dia nihena kely taorian'ny fanakanana ny inhibitor MCC950, saingy tsy nisy ny fahasamihafana. manan-danja (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) taorian'ny fanakanana ny MCC950., Ny sekretera IL-1β dia nihena be tao amin'ny vondrona G. duodenalis cyst-infected, ny pcDNA3.1-alpha-2 giardine group, ary ny pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine group (G. duodenalis: ANOVA, F(9). , 58) = 3,540 , P = 0,0120; ) = 3,540, P = 0,0164).Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine dia manelanelana ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 in vivo.
Ny pcDNA3.1(+)-giardines dia manetsika ny inflammasome mpampiantrano NLRP3 ao amin'ny vivo.Ny totozy dia natao vaksiny (IM) miaraka amin'ny recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine na pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine ary avy eo notsaboina tamin'ny MCC950 (ip; MCC950 group) na tsia (groupe dummy). ).Ny vondrona fitsaboana plasmid PBS na pcDNA3.1 (+) dia nampiasaina ho fanaraha-maso ratsy, ny vondrona fitsaboana kista G. duodenalis dia nampiasaina ho fanaraha-maso tsara.Vondrona andrana sy fomba fitsaboana.b Ny haavon'ny serum IL-1β amin'ny totozy dia norefesina tamin'ny andro 7 tamin'ny assay ELISA.Ny fahasamihafana eo amin'ny vondrona ao amin'ny vondrona MOCK dia nodinihina tamin'ny fampiasana ANOVA tokana, ary ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona MOCK sy ny vondrona MCC950 dia nodinihina tamin'ny fampiasana t-test an'ny SPSS software version 22.0.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe eo amin'ny vondrona fitsaboana ao amin'ny vondrona MOCK, * P <0.05 ary *** P <0.001;Ny famantarana dolara ($) dia manondro fahasamihafana lehibe eo amin'ny vondrona tsirairay ao amin'ny vondrona MOCK sy ny vondrona MCC950 amin'ny P <0.05.Vokatry ny fanandramana biolojika tsy miankina fito.i, tsindrona intramuscular, ns, tsy misy dikany (P> 0.05)
Mba hanadihadiana ny fiantraikan'ny alpha-2 sy alpha-7.3 giardine-mediated activation an'ny NLRP3 host inflammasome amin'ny G. duodenalis infectivity, dia nampiasa totozy WT C57BL / 6 izahay ary nanindrona alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine.ny plasmid dia natsindrona intramuscularly, rehefa afaka 3 andro amin`ny alalan`ny gastric fantsona ny G. duodenalis kista, ary avy eo dia nandinika ny totozy nandritra ny 7 andro.Ny drafitra amin'ny antsipiriany momba ny fanandramana dia aseho amin'ny sary 5a.Ny lanjan'ny totozy tsirairay dia norefesina isan'andro, ny santionan'ny tavy duodenal vaovao dia nangonina tamin'ny andro faha-7 taorian'ny fitantanana tamin'ny alalan'ny fantsona gastric, norefesina ny isan'ny trophozoites, ary hita ny fiovan'ny histopathologique.Araka ny aseho amin'ny sary 5b, miaraka amin'ny fitomboan'ny fotoana famahanana, dia nitombo tsikelikely ny BW ny totozy isaky ny vondrona.Nanomboka nihena ny MT ny totozy tamin'ny andro faha-3 taorian'ny fitantanana intragastric ny kista G. duodenalis, ary avy eo nitombo tsikelikely.Ny fampandehanana ny inflammasome NLRP3 vokatry ny tsindrona intramuscular ny alpha-2 giardine sy alpha7.3 giardine dia nanamaivana ny fahaverezan'ny lanja tamin'ny totozy (Day 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0 .9754 Andro 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 Andro 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; Andro 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; Andro 3 : pcDNA3.1-alpha-2 giardine 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 Andro 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083; Andro 4: pcDNA3.1-alpha-2 giardine , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, Andro 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P < 0.0001, Andro faha-5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Andro 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Andro 6: pcDNA3 . alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Andro 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;Andro 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Andro 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001).Ny enta-mavesatry ny parasy dia nodinihina tao amin'ny duodenum (sary 5c).Raha ampitahaina amin'ny fanaraha-maso tsara tsy voatsabo sy ny vondrona nampidirina tamin'ny vector pcDNA3.1 tsy misy na inona na inona, dia nihena be ny isan'ny G. duodenalis trophozoites tamin'ireo vondrona nampidirina tamin'ny α-2 giardine sy α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha). -2 giardine : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).Ankoatra izany, ny giardine alfa-7.3 dia niaro kokoa ny totozy noho ny giardine alfa-2 (ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0081).Ny vokatry ny fandokoana HE dia aseho amin'ny sary.5d–f.Ny totozy voatsindrona amin'ny alpha-2 giardine sy ny alpha-7.3 giardine dia manana ratra kely kokoa amin'ny tavy duodenal, miseho amin'ny fahasimban'ny villus, raha ampitahaina amin'ny totozy voatsindrona amin'ny G. duodenalis sy ny totozy voatsindrona amin'ny G. duodenalis miaraka amin'ny vector pcDNA3 tsy misy na inona na inona .1 Zoom.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 na P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0028 na P = 0.0055) ary mihena ny atrophy crypt (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.470, P = 0.0264 na P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine , F(3, 24) = 1,470, P = 0,0371 na P = 0,0191).Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny alpha-2 giardine sy alpha-7,3 giardine dia mampihena ny infectivity ny G. duodenalis amin'ny alàlan'ny fampandehanana ny inflammasome NLRP3 amin'ny vivo.
Ny anjara asan'ny pcDNA3.1 (+) -giardins amin'ny aretina G. duodenalis.Ny totozy dia natao vaksiny (IM) miaraka amin'ny recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine na pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine ary avy eo dia nanohitra tamin'ny G. duodenalis cysts (ig).Ny vondrona PBS sy ny pcDNA3.1 (+) + ny vondrona fitsaboana kista duodenal dia nampiasaina ho vondrona fanaraha-maso ratsy, ary ny vondrona fitsaboana kista duodenal dia nampiasaina ho vondrona fanaraha-maso tsara.Vondrona andrana sy fomba fitsaboana.b Ny MT ny totozy amin'ny tsirairay amin'ireo vondrona fitsaboana isan-karazany dia nanara-maso nandritra ny 7 andro taorian'ny fanamby.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe eo amin'ny vondrona ao amin'ny vondrona G. duodenalis sy ny pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine group, * P <0.05, ** P <0.01, ary *** P <0.001;ny marika dolara ($) dia manondro fahasamihafana lehibe eo amin'ny vondrona G. duodenalis tsirairay sy ny vondrona pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 jardine, $$P<0.01 ary $$$P<0.001.c Ny enta-mavesatry ny parasitika dia nofaritana tamin'ny fanisana ny isan'ny trophozoites amin'ny 1 ml ny lavage duodenal avy amin'ny duodenum (3 sm ny halavany) ary naseho ho isan'ny parasy isaky ny sm duodenum.Ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona otrikaretina G. duodenalis, ny pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine group, ary ny pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine group dia nodinihina tamin'ny ANOVA tokana tamin'ny fampiasana rindrambaiko SPSS version 22.0.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe amin'ny ** P <0.01 sy *** P <0.001.d Fiovana histopathologique amin'ny duodenum.Ny zana-tsipìka mena dia manondro ny fahasimban'ny villi, ny zana-tsipìka maitso dia manondro ny fahasimban'ny crypts.Haavony: 100 µm.e, f Famakafakana statistika ny haavon'ny villus duodenal totozy (e) sy ny haavon'ny crypt (f).Ny fahasamihafana misy eo amin'ny vondrona ao amin'ny Figure 1d dia nodinihina tamin'ny ANOVA tokana tamin'ny fampiasana rindrambaiko SPSS version 22.0.Ny asterisk dia manondro fahasamihafana lehibe amin'ny * P <0.05 sy ** P <0.01.Vokatry ny fanandramana biolojika tsy miankina fito.ns, tsy manan-danja (P> 0,05)
Giardia duodenum dia katsentsin'ny tsinay fanta-daza amin'ny olombelona sy ny biby mampinono hafa izay miteraka giardiasis.Tamin'ny taona 2004, dia tafiditra tao amin'ny OMS tsy niraharaha ny aretina Initiative noho ny fihanaky ny avo nandritra ny 6 taona, indrindra fa any amin'ny fiaraha-monina ambany sata ara-tsosialy [32].Ny rafi-kery fanefitra voajanahary dia manana anjara toerana lehibe amin'ny valin'ny hery fiarovana amin'ny aretina G. duodenalis.Ny macrophages totozy dia voalaza fa mandevona sy mamono ny G. duodenalis amin'ny alàlan'ny famoahana fandrika extracellular [33].Ny fandinihanay teo aloha dia naneho fa ny G. duodenalis, parasite extracellular tsy misy invasive, dia manetsika ny p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ary ny NLRP3 làlam-pandrefesana amin'ny macrophages amin'ny totozy mba hifehezana ny valin'ny areti-mifindra, ary ny GEV navoaka dia mety hanatsara ity dingana ity.13], 24].Na izany aza, ny tena PAMPs tafiditra ao amin'ny NLRP3 inflammasome-regulated inflammatoire ao amin'ny GEV sy ny anjara asan'ny NLRP3 inflammasome amin'ny giardiasis dia mbola hazavaina.Mba hamaliana ireo fanontaniana roa ireo dia nanao ity fianarana ity izahay.
Ny inflammasome NLRP3 dia hita ao amin'ny cytoplasm amin'ny sela immune ary azo ampiasaina amin'ny singa isan-karazany toy ny kristaly asidra uric, poizina, bakteria, viriosy ary parasy.Ao amin'ny fandalinana bakteria, ny poizina dia fantatra ho PAMPs manan-danja izay manetsika ireo sensor amin'ny inflammatoire, mitarika ho amin'ny areti-maso sy ny fahafatesan'ny sela [34].Ny poizina samihafa ara-drafitra sasany, toy ny hemolysin avy amin'ny Staphylococcus aureus [35] sy Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) avy amin'ny enterotoxin (NHE) [37], dia mandrisika ny fampidinana ny areti-maso NLRP3.Ny fanadihadiana viraliny dia naneho fa ny proteinina virulence toy ny proteinina valopy (E) SARS-COV-2 [38] sy ny proteinina Zika NS5 [39] dia PAMP manan-danja eken'ny NLRP3 mpandray.Ao amin'ny fanadihadiana momba ny katsentsitra, maro ny katsentsitra no voalaza fa mifandray amin'ny fampidiran-drivotra mampiantrano, toy ny Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], ary Leishmania [42].Ny proteinina granule matevina GRA35, GRA42, ary GRA43, mifandray amin'ny virulence ny Toxoplasma gondii, dia ilaina amin'ny fampidirana pyroptosis amin'ny macrophages rat Lewis [43].Ankoatr'izay, ny fanadihadiana Leishmania sasany dia nifantoka tamin'ny molekiola tsirairay tafiditra ao amin'ny inflammasome NLRP3, toy ny lipophosphoglycan membrane parasite [44] na metalloprotease zinc [45].Anisan'ny annexin-toy ny alpha-giardin fianakavian'ny fototarazo, alpha-1 giardin dia hita fa mety ho kandidà vaksiny manome fiarovana amin'ny G. duodenalis amin'ny totozy modely [18].Tao anatin'ny fandalinanay dia nisafidy ny G. duodenalis virulence factor alpha-2 sy alpha-7,3 giardines izahay, izay miavaka amin'ny giardia saingy tsy dia misy tatitra firy.Ireo fototarazo kendrena roa ireo dia nalaina tao amin'ny pcDNA3.1 (+) eukaryotic expression system vector ho an'ny famakafakana ny fampidinana ny areti-maso.
Ao amin'ny maodelin'ny totozy, ny sombintsombin'ny caspase notapatapahina dia ampiasaina ho marika amin'ny fampahavitrihana mamaivay.Amin'ny fanentanana, ny NLRP3 dia mifandray amin'ny ASC, manangona procaspases, ary miteraka caspases mavitrika izay manapaka ny pro-IL-1β sy ny pro-IL-18 ho matotra IL-1β sy IL-18, tsirairay avy -18.Ny caspases inflammatory (caspases-1, -4, -5 ary -11) dia fianakaviana voatahiry amin'ny protease cysteinees izay manakiana ny fiarovana voajanahary ary tafiditra amin'ny areti-maso sy ny fahafatesan'ny sela [46].Ny caspase-1 dia mavitrika amin'ny inflammasomes kanonika [47], raha ny caspases-4, -5, ary -11 kosa dia tapaka mandritra ny fananganana inflammasomes atypical [48].Ao anatin'ity fandalinana ity dia nampiasa macrophages peritoneal totozy ho modely izahay ary nanadihady ny p20 caspase-1 nanasaraka ny caspase-1 ho marika ny fampidiran-drivotra NLRP3 mpampiantrano amin'ny fandalinana ny aretina G. duodenalis.Ny valiny dia naneho fa maro ny alpha-giardinas no tompon'andraikitra amin'ny fampahavitrihana mahazatra ny areti-maso, izay mifanaraka amin'ny fahitana ny molekiola virulence lehibe tafiditra amin'ny bakteria sy viriosy.Na izany aza, ny fandinihantsika dia efijery mialoha fotsiny ary misy molekiola hafa afaka manetsika ny inflammasomes tsy klasika, satria ny fandinihanay teo aloha dia nahita ny inflammasomes klasika sy tsy klasika amin'ny aretina G. duodenalis [13].Mba hamaritana bebe kokoa raha mifandray amin'ny inflammasome NLRP3 ny p20 caspase-1, dia nafindranay ny giardins alpha-2 sy alpha-7.3 ho ao amin'ny macrophages peritoneal totozy mba hamaritana ny haavon'ny proteinina molekiola fototra sy ny haavon'ny oligomerization ASC, izay manamafy fa samy mihetsika ny α-giardins. inflammasome NLRP3.Ny vokatray dia tsy mitovy amin'ny an'ny Manko-Prykhoda et al., Izay nitatitra fa ny fanentanana ny sela Caco-2 miaraka amin'ny G. muris na E. coli EPEC dia mety hampitombo ny hamafin'ny fluorescence NLRP3, ASC, ary caspase-1, Na dia tsy dia lehibe loatra aza, raha ny fomba fampitomboana ny G. muris sy E. coli dia nampitombo ny haavon'ny proteinina telo [49].Ity tsy fitovian-kevitra ity dia mety noho ny fahasamihafan'ny fifantenana ny karazana Giardia, ny tsipika sela ary ny sela voalohany.Nanao fitiliana in vivo ihany koa izahay tamin'ny fampiasana MCC950 tamin'ny totozy WT C57BL / 6 vavy 5 herinandro, izay mora voan'ny G. duodenalis.MCC950 dia molekiola kely matanjaka sy mifantina NLRP3 inhibitor izay manakana ny fampahavitrihana NLRP3 kanonika sy tsy kanonika amin'ny fifantohana nanomolar.Ny MCC950 dia manakana ny fampahavitrihana NLRP3 fa tsy misy fiantraikany amin'ny fampahavitrihana ny AIM2, NLRC4, ary NLRP1 lalan'ny inflammatoire na TLR signaling pathways [27].MCC950 dia manakana ny fampahavitrihana NLRP3 fa tsy manakana ny fanombohana NLRP3, K + efflux, Ca2 + influx, na ny fifandraisana eo amin'ny NLRP3 sy ASC;fa kosa, manakana ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 amin'ny fanakanana ny oligomerization ASC [27].Noho izany, nampiasa MCC950 izahay tamin'ny fandalinana in vivo mba hamaritana ny anjara asan'ny inflammasome NLRP3 taorian'ny fampidirana giardine.Ny caspase-1 p10 mavitrika dia manapaka ny cytokines pro-inflammatoire pro-IL-1β sy pro-IL-18 ho matotra IL-1β sy IL-18 [50].Ao anatin'ity fandalinana ity, ny serum IL-1β amin'ny totozy voatsabo giardine miaraka amin'ny MCC950 na tsy misy MCC950 dia nampiasaina ho famantarana raha navitrika ny inflammasome NLRP3.Araka ny efa nampoizina, ny fitsaboana MCC950 dia nampihena be ny haavon'ny serum IL-1β.Ireo angon-drakitra ireo dia mampiseho mazava tsara fa ny G. duodenalis giardin alfa-2 sy giardin alfa-7.3 dia afaka manetsika ny inflammasome totozy NLRP3.
Ny angon-drakitra manan-danja voaangona nandritra ny folo taona lasa dia nanaporofo fa ny IL-17A no tompon'andraikitra tompon'andraikitra amin'ny tsy fahampiana amin'ny G. muris, mandrisika ny famantarana IL-17RA, mamokatra peptides antimicrobial, ary mifehy ny fampandehanana famenoana [51].Na izany aza, ny otrikaretina Giardia dia miseho matetika kokoa amin'ny olon-dehibe tanora, ary voalaza fa ny otrikaretina Giardia amin'ny totozy tanora dia tsy manetsika ny valin'ny IL-17A mba hampihatra ny fiarovany [52], ka mahatonga ny mpikaroka hitady Giardia immunomodulatory hafa.Mekanisma ny aretina helminth.Ireo mpanoratra ny fanadihadiana vao haingana dia nitatitra fa ny G. muris dia afaka manetsika ny inflammasome NLRP3 avy amin'ny E. coli EPEC, izay mampiroborobo ny famokarana peptides antimicrobial ary mampihena ny fahafaha-mifatotra sy ny isan'ny trophozoites ao amin'ny taratasy mivalona amin'ny tsinay, ka mampihena ny hamafin'ny colon. aretina vokatry ny bacilli [49].Ny inflammasome NLRP3 dia tafiditra amin'ny fivoaran'ny aretina isan-karazany.Ny fanadihadiana dia naneho fa ny Pseudomonas aeruginosa dia miteraka autophagy amin'ny macrophages mba hisorohana ny fahafatesan'ny sela, ary io dingana io dia miankina amin'ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 [53].Ho an'ny N. caninum, ny fampahavitrihana ny karazana oksizenina reactive amin'ny inflammasome NLRP3 dia mametra ny replication ao amin'ny mpampiantrano, ka mahatonga azy io ho tanjona fitsaboana mety [9].Paracoccidioides brasiliensis dia hita fa mampirisika ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 ao amin'ny sela dendritika azo avy amin'ny tsoka totozy, ka miteraka ny famotsorana ny cytokine inflammatoire IL-1β, izay mitana anjara toerana lehibe amin'ny fiarovana ny mpampiantrano [10].Ny karazana Leishmania maromaro, anisan'izany ny L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, ary L. infantum chagasi, dia manetsika ny NLRP3 sy ny caspase-1 miankina amin'ny ASC amin'ny macrophages, ary koa ny aretina Leishmania.Ny famerenan'ny parasita dia mihamitombo amin'ny tsy fahampian'ny totozy ao amin'ny fototarazo NLRP3 / ASC / caspase-1 [11].Zamboni et al.Ny otrikaretina Leishmania dia voalaza fa mandrisika ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 amin'ny macrophages, izay mametra ny famerenan'ny parasite intracellular.Noho izany, Leishmania dia mety hanakana ny fampahavitrihana NLRP3 ho paikady fisorohana.Ao amin'ny fandalinana in vivo, ny inflammasome NLRP3 dia nandray anjara tamin'ny fanafoanana ny Leishmania, saingy tsy nisy fiantraikany tamin'ny tavy [54].Mifanohitra amin'izany, amin'ny fandalinana helminthiasis, ny fampahavitrihana ny inflammasome NLRP3 dia nanafoana ny fiarovan-tenan'ny mpampiantrano amin'ny helminthiasis gastrointestinal [12].Shigella dia iray amin'ireo bakteria miteraka aretim-pivalanana manerantany.Ireo bakteria ireo dia afaka mampirisika ny famokarana IL-1β amin'ny alàlan'ny efflux K + mpanelanelana P2X7, karazana oksizenina mihetsiketsika, asidra lysosomal, ary fahasimbana mitochondrial.Ny inflammasome NLRP3 dia mifehy ny phagocytosis sy ny asan'ny bakteria amin'ny macrophages amin'ny Shigella [55].Ny fandinihana Plasmodium dia naneho fa ny totozy tsy ampy AIM2, NLRP3 na caspase-1 voan'ny Plasmodium dia mamokatra interferon karazana 1 avo lenta ary mahatohitra kokoa ny aretina Plasmodium [56].Na izany aza, ny anjara asan'ny alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine amin'ny fampidiran-dra ny pathogenic ny areti-maso NLRP3 amin'ny totozy dia tsy mazava.
Ao anatin'ity fandalinana ity, ny fanakanana ny inflammasome NLRP3 nataon'i MCC950 dia nampihena ny BW ary nampitombo ny isan'ny trophozoites amin'ny tsiranoka lavage amin'ny tsinay amin'ny totozy, ka miteraka fiovana mahery vaika kokoa amin'ny tavy duodenal.Alpha-2 giardine sy alpha-7.3 giardine dia manetsika ny NLRP3 inflammasome totozy mpampiantrano, mampitombo ny lanjan'ny totozy, mampihena ny isan'ny trophozoites amin'ny fluid lavage intestinal, ary manamaivana ny lesoka duodenal pathological.Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny G. duodenalis dia afaka manetsika ny inflammasome mpampiantrano NLRP3 amin'ny alàlan'ny alpha-2 giardine sy alpha-7,3 giardine, mampihena ny pathogenicity ny G. duodenalis amin'ny totozy.
Amin'ny fitambarany, ny valiny dia mampiseho fa ny alpha-2 sy alpha-7.3 giardines dia mampirisika ny fampahavitrihana ny NLRP3 host inflammasome ary mampihena ny infectivity ny G. duodenalis amin'ny totozy.Noho izany, ireo molekiola ireo dia mampanantena lasibatra amin'ny fisorohana ny giardiasis.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: hevitra.Vao haingana no nambara fa tsy mahazaka zava-mahadomelina i Pat Inflamm.2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: famerenana ny pharmacotherapy.Expert Opinion of a pharmacist.2007;8:1885–902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis, fanoherana ny zava-mahadomelina ary ny fahitana lasibatra vaovao.Manimba ny lasibatra zava-mahadomelina Disord.2010;10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, sns. NLRP3 inflammasome sy areti-mifindra.Oxide Med Cell Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. Ny anjara asan'ny inflammasome amin'ny areti-maso sy ny homamiadana.Gastroenterology.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical sy atypical NLRP3 inflammasome activation eo amin'ny sampanan'ny fandeferana ny hery fiarovana sy ny tsinay mamaivay.pre-immune.2017;8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.Ny ROS-mediated NLRP3 inflammasome activation dia tafiditra amin'ny valin'ny N. caninum infection.Vector parasite.2020;13:449.