Misaotra anao nitsidika ny Nature.com.Ny kinova browser ampiasainao dia manana fanohanana CSS voafetra.Mba hahazoana traikefa tsara indrindra, manoro hevitra anao izahay hampiasa navigateur nohavaozina (na esory ny Compatibility Mode amin'ny Internet Explorer).Mandritra izany fotoana izany, mba hiantohana ny fanohizana ny fanohanana, dia hanolotra ny tranokala tsy misy fomba sy JavaScript izahay.
Toxoplasma gondii dia parasite protozoan intracellular izay manova ny tontolo mikron'ny mpampiantrano voan'ny aretina ary fantatra fa misy ifandraisany amin'ny firongatry ny fivontosan'ny atidoha.Ao anatin'ity fanadihadiana ity dia mihevitra izahay fa ny miRNA-21 exosomal avy amin'ny otrikaretina Toxoplasma dia mampiroborobo ny fitomboan'ny fivontosana ao amin'ny atidoha.Ny exosomes avy amin'ny microglia BV2 voan'ny Toxoplasma dia voamarika ary voamarina ny fampidirana ny sela glioma U87.Ny mombamomba ny fanehoana microRNA exosomal dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny microRNA sy microRNA-21A-5p mifandraika amin'ny Toxoplasma gondii sy ny fivontosana.Nanadihady ihany koa ny haavon'ny mRNA amin'ny fototarazo mifandraika amin'ny fivontosana ao amin'ny sela glioma U87 amin'ny alàlan'ny fanovana ny haavon'ny miR-21 amin'ny exosomes sy ny fiantraikan'ny exosome amin'ny fihanaky ny sela glioma U87 olombelona.Ao amin'ny exosomes ny sela glioma U87 voan'ny Toxoplasma gondii, dia mitombo ny fanehoana ny microRNA-21 ary mihena ny asan'ny fototarazo antitumor (FoxO1, PTEN, ary PDCD4).Ny exosomes azo avy amin'ny BV2 voan'ny Toxoplasma dia miteraka fitomboan'ny sela glioma U87.Ny exosome dia mandrisika ny fitomboan'ny sela U87 amin'ny maodely fivontosana totozy.Manoro hevitra izahay fa ny fitomboan'ny miR-21 exosomal ao amin'ny microglia BV2 voan'ny Toxoplasma dia mety hanana anjara toerana lehibe amin'ny maha-mpanentana ny fitomboan'ny sela ao amin'ny sela glioma U87 amin'ny alàlan'ny fampihenana ny fototarazo antitumor.
Tombanana fa maherin'ny 18,1 tapitrisa ny trangan'ny homamiadana mandroso no voamarina eran-tany tamin'ny taona 2018, ary manodidina ny 297,000 eo ho eo ny fivontosana ao amin'ny rafi-pitatitra foibe voamarika isan-taona (1,6% amin'ny tumors rehetra)1.Ny fikarohana teo aloha dia naneho fa ny antony mety hiteraka fivontosana ao amin'ny atidohan'olombelona dia ahitana vokatra simika isan-karazany, tantaram-pianakaviana, ary taratra ionizing avy amin'ny fitaovana fitsaboana sy diagnostika.Na izany aza, tsy fantatra ny tena antony mahatonga ireo aretina ireo.Manodidina ny 20% amin'ny homamiadana rehetra maneran-tany dia vokatry ny areti-mifindra, anisan'izany ny viriosy, bakteria ary parasy3,4.Ny otrikaretina otrikaretina dia manakorontana ny fototarazon'ny sela mpampiantrano, toy ny fanamboarana ADN sy ny tsingerin'ny sela, ary mety hitarika amin'ny areti-maso maharitra sy fahasimban'ny hery fiarovana5.
Ny otrikaretina mifandray amin'ny homamiadan'ny olombelona no otrikaretina virosy mahazatra indrindra, anisan'izany ny papillomavirus olombelona sy ny viriosy hepatita B sy C.Ny parasita dia afaka mitana anjara toerana mety amin'ny fivoaran'ny homamiadan'ny olombelona.Karazana parasy maromaro, dia ny Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis ary Hymenolepis nana, no voarohirohy tamin'ny karazana homamiadan'ny olombelona 6,7,8.
Toxoplasma gondii dia protozoan intracellular izay mifehy ny microenvironment amin'ny sela mpampiantrano otrikaretina.Ity parasy ity dia tombanana ho 30% eo ho eo amin'ny mponina eran-tany, ka mampidi-doza ny mponina manontolo9,10.Ny Toxoplasma gondii dia mety hamindra taova tena ilaina, anisan'izany ny rafi-pitatitra foibe (CNS), ary miteraka aretina lehibe toy ny meningite mahafaty sy encephalitis, indrindra amin'ireo marary tsy ampy hery fiarovana9.Na izany aza, ny Toxoplasma gondii dia afaka manova ny tontolo iainan'ny olona voan'ny aretina amin'ny alàlan'ny fanovana ny fitomboan'ny sela sy ny valin'ny immune amin'ny olona tsy mahazaka, izay mitarika amin'ny fikojakojana ny aretina mitaiza asymptomatic9,11.Mahaliana fa raha jerena ny fifandraisana misy eo amin'ny fihanaky ny T. gondii sy ny fivontosan'ny fivontosana ao amin'ny ati-doha, ny tatitra sasany dia milaza fa ny fiovan'ny tontolo iainana ao amin'ny vivo noho ny otrikaretina T. gondii mitaiza dia mitovy amin'ny microenvironment tumor.
Exosome dia fantatra amin'ny hoe intercellular communicators izay manome votoaty biolojika, ao anatin'izany ny proteinina sy ny asidra nokleika, avy amin'ny sela manodidina16,17.Ny exosome dia mety hisy fiantraikany amin'ny fizotry ny biolojika mifandraika amin'ny fivontosana toy ny anti-apoptosis, angiogenesis, ary ny metastazy ao amin'ny tontolo mikrok'i tumor.Indrindra indrindra, ny miRNAs (miRNAs), ny RNA kely tsy misy kodia eo amin'ny 22 nucleotides ny halavany, dia mpandrindra fototarazo post-transcriptional manan-danja izay mifehy mihoatra ny 30% amin'ny mRNA olombelona amin'ny alàlan'ny miRNA-induced silencing complex (miRISC).Ny Toxoplasma gondii dia afaka manakorontana ny fizotran'ny biolojika amin'ny alàlan'ny fifehezana ny fitenin'ny miRNA amin'ny mpampiantrano voan'ny aretina.Ny miRNA mpampiantrano dia misy famantarana manan-danja amin'ny fifehezana ny fizotran'ny biolojika mpampiantrano mba hahatratrarana ny paikadin'ny parasy.Noho izany, ny fandalinana ny fiovan'ny mombamomba ny miRNA mpampiantrano amin'ny otrikaretina amin'ny T. gondii dia afaka manampy antsika hahatakatra tsara kokoa ny fifandraisana misy eo amin'ny mpampiantrano sy T. gondii.Tena, Thirugnanam et al.15 dia nanolo-kevitra fa ny T. gondii dia mampiroborobo ny homamiadan'ny ati-doha amin'ny alàlan'ny fanovana ny fiteniny amin'ny miRNA mpampiantrano manokana mifandray amin'ny fitomboan'ny fivontosana ary nahita fa ny T. gondii dia mety miteraka glioma amin'ny biby andrana.
Ity fandinihana ity dia mifantoka amin'ny fanovana ny exosomal miR-21 amin'ny microglia mpampiantrano voan'ny Toxoplasma BV2.Hitanay ny mety ho anjara asan'ny miR-21 exosomal niova amin'ny fitomboan'ny sela glioma U87 noho ny fihazonana ny nucleus an'ny FoxO1 / p27, izay lasibatry ny miR-21 be loatra.
Ny exosomes azo avy amin'ny BV2 dia azo tamin'ny fampiasana centrifugation differential ary nohamarinina tamin'ny fomba isan-karazany mba hisorohana ny fandotoana amin'ny singa sela na vesicles hafa.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) dia nampiseho lamina miavaka eo amin'ny proteinina nalaina avy amin'ny sela BV2 sy ny exosomes (sary 1A), ary ny santionany dia nanombantombana ny fisian'ny Alix, izay nodinihina tamin'ny alalan'ny Western blotting ny exosomal proteinina marika in.Ny fametahana Alix dia hita ao amin'ny proteinina exosome fa tsy ao amin'ny proteinina lysate sela BV2 (sary 1B).Ankoatr'izay, ny RNA voadio avy amin'ny exosomes avy amin'ny BV2 dia nodinihina tamin'ny fampiasana bioanalyzer.Ny subunits ribosomal 18S sy 28S dia zara raha hita ao amin'ny lamin'ny fifindra-monina RNA exosomal, izay manondro ny fahadiovana azo antoka (sary 1C).Farany, nasehon'ny microscopie electron transmission fa manodidina ny 60-150 nm ny haben'ny exosome voamarika ary manana rafitra mitovy amin'ny kaopy mahazatra amin'ny morphologie exosome (sary 1D).
Famaritana ny exosome avy amin'ny sela BV2.(A) Pejin'ny tatitra momba ny fiarovana.Ny proteinina dia natokana avy amin'ny sela BV2 na exosomes azo avy amin'ny BV2.Ny lamin'ny proteinina dia samy hafa eo amin'ny sela sy ny exosomes.(B) Famakafakana blot tandrefana momba ny marika exosomal (Alix).(C) Fanombanana ny RNA voadio avy amin'ny sela BV2 sy ny exosomes avy amin'ny BV2 amin'ny fampiasana bioanalyzer.Noho izany, ny subunits ribosomal 18S sy 28S ao amin'ny sela BV2 dia zara raha hita ao amin'ny RNA exosomal.(D) Ny mikraoskaopy elektronika fampitana dia nampiseho fa ny exosomes tafasaraka amin'ny sela BV2 dia voaloto tamin'ny 2% uranyl acetate.Exosome dia manodidina ny 60-150 nm ny habeny ary miendrika kaopy (Song sy Jung, angona tsy navoaka).
Ny fampidirana sela ny exosomes avy amin'ny BV2 ao amin'ny sela glioma olombelona U87 dia nojerena tamin'ny fampiasana mikroskopika confocal.Ny exosomes misy marika PKH26 dia hita ao amin'ny cytoplasm amin'ny sela U87.Ny nuclei dia voapoizina amin'ny DAPI (sary 2A), izay manondro fa ny exosomes avy amin'ny BV2 dia azo ampidirina amin'ny sela mpampiantrano ary misy fiantraikany amin'ny tontolon'ny sela mpandray.
Ny fampidirana ny exosomes avy amin'ny BV2 ho ao amin'ny sela glioma U87 sy ny exosomes avy amin'ny BV2 voan'ny Toxoplasma RH dia nahatonga ny fihanaky ny sela glioma U87.(A) Exosome voahodidin'ny sela U87 refesina amin'ny mikroskopika confocal.Ny selan'ny glioma U87 dia natsipy niaraka tamin'ny exosomes misy marika PKH26 (mena) na tsy misy fanaraha-maso mandritra ny 24 ora.Nolokoina tamin'ny DAPI (manga) ny nuclei ary nojerena teo ambanin'ny mikraoskaopy confocal (barony: 10 μm, x 3000).(B) Ny fiparitahan'ny sela glioma U87 dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny fampitomboana ny sela.Ny sela glioma U87 dia notsaboina tamin'ny exosomes nandritra ny fotoana voatondro. * P <0.05 dia azo tamin'ny fitsapana t an'ny mpianatra. * P <0.05 dia azo tamin'ny fitsapana t an'ny mpianatra. *P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P <0.05 amin'ny t-test an'ny mpianatra. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 azo tamin'ny fampiasana t-test an'ny mpianatra.
Taorian'ny fanamafisana ny fampidirana ny exosomes avy amin'ny BV2 ao amin'ny sela glioma U87, dia nanao fitiliana ny fihanaky ny sela izahay mba hanadihady ny anjara andraikitry ny exosomes azo avy amin'ny BV2 avy amin'ny Toxoplasma amin'ny fampandrosoana ny sela glioma olombelona.Ny fitsaboana ny sela U87 miaraka amin'ny exosomes avy amin'ny sela BV2 voan'ny T. gondii dia nampiseho fa ny exosomes azo avy amin'ny BV2 voan'ny T. gondii dia nahatonga ny fihanaky ny sela U87 avo kokoa raha oharina amin'ny fanaraha-maso (sary 2B).
Fanampin'izany, ny fitomboan'ny sela U118 dia nanana vokatra mitovy amin'ny U87, satria ny toxoplasma nandrisika ny exosome dia nahatonga ny haavon'ny fihanaky ny avo indrindra (tsy hita ny data).Mifototra amin'ireo angon-drakitra ireo, azontsika atao ny manondro fa ny exosomes voan'ny Toxoplasma avy amin'ny BV2 dia manana anjara toerana lehibe amin'ny fihanaky ny sela glioma.
Mba hanadihadiana ny fiantraikan'ny toxoplasma-infected BV2-avy amin'ny exosomes amin'ny fivoaran'ny tumor, dia nanindrona ny sela glioma U87 tao anaty totozy miboridana ho an'ny maodely xenograft izahay ary nanindrona ny exosomes azo avy amin'ny BV2 na ny exosomes avy amin'ny RH-infected BV2.Taorian'ny fisehoan'ny fivontosana taorian'ny herinandro 1, ny vondrona andrana tsirairay avy amin'ny totozy 5 dia nozaraina araka ny haben'ny fivontosana mba hamaritana ny toerana niaingana mitovy, ary ny haben'ny fivontosana dia norefesina nandritra ny 22 andro.
Ao amin'ny totozy miaraka amin'ny modely xenograft U87, ny haben'ny fivontosana lehibe kokoa sy ny lanjany dia voamarika tao amin'ny vondrona exosome voan'ny RH avy amin'ny BV2 tamin'ny andro 22 (sary 3A, B).Etsy ankilany, tsy nisy fahasamihafana lehibe teo amin'ny haben'ny fivontosana teo amin'ny vondrona exosome avy amin'ny BV2 sy ny vondrona fanaraha-maso taorian'ny fitsaboana exosome.Fanampin'izany, ny totozy voatsindrona amin'ny sela glioma sy ny exosome dia nampiseho ny habetsaky ny fivontosana lehibe indrindra tao amin'ny vondrona exosomes azo avy amin'ny BV2 voan'ny RH (sary 3C).Ireo valiny ireo dia mampiseho fa ny exosomes voan'ny Toxoplasma avy amin'ny BV2 dia miteraka fitomboan'ny glioma amin'ny maodely fivontosana totozy.
Oncogenesis (AC) an'ny exosomes azo avy amin'ny BV2 amin'ny modely totozy xenograft U87.Ny haben'ny tumor (A) sy ny lanjany (B) dia nitombo be tamin'ny totozy miboridana BALB / c tsaboina amin'ny exosomes voan'ny RH avy amin'ny BV2.Ny totozy miboridana BALB / c (C) dia natsindrona subcutaneously miaraka amin'ny sela 1 x 107 U87 mihantona ao anaty fangaro Matrigel.Enina andro taorian'ny tsindrona, 100 μg avy amin'ny exosomes BV2 dia notsaboina tamin'ny totozy.Ny haben'ny fivontosana sy ny lanjany dia norefesina tamin'ny andro voalaza sy taorian'ny sorona. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05.
Ny angon-drakitra dia naneho fa ny 37 miRNAs (16 overexpressed sy 21 downexpressed) mifandray amin'ny tsy fahampiana na ny fivoaran'ny tumor dia niova be tao amin'ny microglia taorian'ny otrikaretina tamin'ny Toxoplasma RH strain (sary 4A).Ny haavon'ny fitenenana miR-21 eo amin'ireo miRNA niova dia nohamafisin'ny RT-PCR amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2, exosomes voatsabo amin'ny sela BV2 sy U87.Ny fanehoana ny miR-21 dia nampiseho fitomboana lehibe amin'ny exosomes avy amin'ny sela BV2 voan'ny Toxoplasma gondii (RH strain) (sary 4B).Ny haavon'ny fitenenana miR-21 amin'ny sela BV2 sy U87 dia nitombo taorian'ny fandraisana ireo exosomes niova (sary 4B).Ny haavon'ny fitenenana miR-21 ao amin'ny atidohan'ny marary fivontosana sy ny totozy voan'ny Toxoplasma gondii (strain ME49) dia avo kokoa noho ny fanaraha-maso (sary 4C).Ireo valiny ireo dia mifandray amin'ny fahasamihafana misy eo amin'ny haavon'ny fitenenana amin'ny microRNA efa voavinavina sy voamarina in vitro sy in vivo.
Fiovana eo amin'ny fanehoana ny exosomal miP-21a-5p amin'ny microglia voan'ny Toxoplasma gondii (RH).(A) Mampiseho fiovana lehibe amin'ny siRNA mifandray amin'ny hery fiarovana na fivontosana taorian'ny aretina T. gondii RH.(B) Ny haavon'ny fitenenana miR-21 dia hita tamin'ny RT-PCR amin'ny fotoana tena izy ao amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2, exosome voatsabo BV2, ary sela U87.(C) Ny haavon'ny fitenenana miR-21 dia hita ao amin'ny tadin'ny atidohan'ny mararin'ny tumor (N = 3) sy ny totozy voan'ny Toxoplasma gondii (strain ME49) (N = 3). * P <0.05 dia azo tamin'ny fitsapana t an'ny mpianatra. * P <0.05 dia azo tamin'ny fitsapana t an'ny mpianatra. *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 dia azo tamin'ny fampiasana t-test an'ny mpianatra. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 azo tamin'ny fampiasana t-test an'ny mpianatra.
Ny exosomes avy amin'ny sela BV2 voan'ny RH dia nitarika ny fitomboan'ny glioma in vivo sy in vitro (sary 2, 3).Mba hamantarana ny mRNA mifandraika, dia nandinika ny haavon'ny mRNA amin'ny fototarazo lasibatra antitumor izahay, boaty forkhead O1 (FoxO1), PTEN, ary ny fahafatesan'ny sela 4 (PDCD4) voarindra ao amin'ny sela U87 voan'ny exosome avy amin'ny BV2 na RH BV2.Ny fanadihadiana momba ny bioinformatics dia naneho fa ny fototarazo mifandraika amin'ny fivontosana, anisan'izany ny fototarazo FoxO1, PTEN, ary PDCD4, dia manana tranokala miR-2121,22.Ny haavon'ny mRNA amin'ny fototarazo kendrena antitumor dia nihena tao amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2 voan'ny RH raha oharina amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2 (sary 5A).Ny FoxO1 dia nampiseho fihenan'ny proteinina ao amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2 voan'ny RH raha oharina amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2 (sary 5B).Mifototra amin'ireo valiny ireo, azontsika atao ny manamarina fa ny exosome avy amin'ny BV2 voan'ny RH dia mampihena ny fototarazo anti-oncogenic, mitazona ny anjara asany amin'ny fitomboan'ny fivontosana.
Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosome dia miteraka fanafoanana ny fototarazo antitumor ao amin'ny sela glioma U87 avy amin'ny Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosomes.(A) PCR tena misy an'ny FoxO1, PTEN ary PDCD4 amin'ny exosomes azo avy amin'ny T. gondii RH-infected BV2 raha oharina amin'ny PBS exosomes.Ny β-actin mRNA dia nampiasaina ho fanaraha-maso.(B) Ny fitenin'ny FoxO1 dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny blotting tandrefana ary ny data densitometry dia nodinihina ara-statistika tamin'ny alàlan'ny programa ImageJ. * P <0.05 dia azo tamin'ny fitsapana t an'ny mpianatra. * P <0.05 dia azo tamin'ny fitsapana t an'ny mpianatra. *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 dia azo tamin'ny fampiasana t-test an'ny mpianatra. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 azo tamin'ny fampiasana t-test an'ny mpianatra.
Mba hahatakarana ny fiantraikan'ny miP-21 amin'ny exosomes amin'ny fifehezana fototarazo mifandraika amin'ny fivontosana, ny sela U87 dia nafindra niaraka tamin'ny inhibitor ny miP-21 tamin'ny fampiasana Lipofectamine 2000 ary ny sela dia nojinjaina 24 ora taorian'ny fifindrana.Ny haavon'ny fitenenana FoxO1 sy p27 ao amin'ny sela nafindra tamin'ny inhibitor miR-21 dia nampitahaina tamin'ny sela voatsabo tamin'ny exosomes avy amin'ny BV2 mampiasa qRT-PCR (sary 6A, B).Ny fifindrana ny inhibitor miR-21 ao amin'ny sela U87 dia nampihena be ny fitenenana FoxO1 sy p27 (sary 6).
RH-infected exosomal BV2-avy amin'ny miP-21 dia nanova ny fitenin'ny FoxO1 / p27 tao amin'ny sela glioma U87.Ny sela U87 dia nafindra niaraka tamin'ny inhibitor miP-21 tamin'ny fampiasana Lipofectamine 2000 ary ny sela dia nojinjaina 24 ora taorian'ny fifindrana.Ny haavon'ny fitenenana FoxO1 sy p27 ao amin'ny sela nafindra tamin'ny inhibitor miR-21 dia nampitahaina tamin'ny haavon'ny sela voatsabo tamin'ny exosomes avy amin'ny BV2 mampiasa qRT-PCR (A, B).
Mba hialana amin'ny valim-piainan'ny mpampiantrano, ny parasy Toxoplasma dia miova ho kista.Izy ireo dia manangana tavy isan-karazany, anisan'izany ny ati-doha, ny fo ary ny hozatry ny taolana, mandritra ny androm-piainan'ny mpampiantrano ary manova ny valin'ny hery fiarovana.Ankoatra izany, izy ireo dia afaka mifehy ny tsingerin'ny sela sy ny apoptose amin'ny selan'ny mpampiantrano, mampiroborobo ny fiparitahan'izy ireo14,24.Ny Toxoplasma gondii dia mamindra ny sela dendritika mpampiantrano, ny neutrophils, ary ny tsipika monocyte / macrophage, anisan'izany ny microglia ao amin'ny atidoha.Ny Toxoplasma gondii dia mampirisika ny fanavahana ny macrophages amin'ny phenotype M2, misy fiantraikany amin'ny fahasitranan'ny ratra aorian'ny fihanaky ny pathogen, ary mifandray amin'ny hypervascularization sy ny fibrosis granulomatous.Ity pathogenesis amin'ny fifindran'ny Toxoplasma ity dia mety misy ifandraisany amin'ny marika mifandray amin'ny fivoaran'ny fivontosana.Ny tontolo feno fankahalana fehezin'ny Toxoplasma dia mety hitovy amin'ny precancer mifanaraka amin'izany.Noho izany dia azo heverina fa ny otrikaretina Toxoplasma dia tokony handray anjara amin'ny fivoaran'ny fivontosan'ny atidoha.Raha ny marina, ny tahan'ny otrikaretina Toxoplasma dia voalaza ao amin'ny serum an'ireo marary manana fivontosana ao amin'ny atidoha.Ho fanampin'izany, ny Toxoplasma gondii dia mety ho mpitrandraka karsinogène iray hafa ary miasa miaraka amin'ny fiaraha-miasa mba hanampiana ireo karsinogenina hafa voan'ny areti-mifindra amin'ny fivontosan'ny ati-doha.Amin'io lafiny io, dia tsara ny manamarika fa ny P. falciparum sy Epstein-Barr virosy synergistically mandray anjara amin'ny fananganana ny lymphoma Burkitt.
Ny andraikitry ny exosome ho mpandrindra eo amin'ny sehatry ny fikarohana momba ny homamiadana dia nodinihina lalina.Na izany aza, ny anjara asan'ny exosome eo amin'ny katsentsitra sy ny mpampiantrano otrikaretina dia mbola tsy takatra tsara.Hatramin'izao, ireo mpandrindra isan-karazany, anisan'izany ny proteinina miafina, dia nanazava ny fizotry ny biôlôjia izay ahafahan'ny katsentsitra protozoana manohitra ny fanafihan'ny mpampiantrano sy mampitoetra ny aretina.Vao haingana, nitombo ny fiheverana fa ny microvesicle mifandray amin'ny protozoan sy ny microRNAs dia mifandray amin'ny sela mpampiantrano mba hamoronana tontolo tsara ho an'ny fahavelomany.Noho izany, ilaina ny fandalinana fanampiny hahitana ny fifandraisana misy eo amin'ny miRNA exosomal niova sy ny fihanaky ny sela glioma.Ny fiovan'ny microRNA (geno cluster miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ary miR-17-92) dia mifamatotra amin'ny mpanentana STAT3 amin'ny macrophages voan'ny toxoplasma, dia fehezina ary miteraka antitra. - apoptose ho setrin'ny aretina Toxoplasma gondii 29 .Ny fihanaky ny toxoplasma dia mampitombo ny fanehoana ny miR-17-5p sy miR-106b-5p, izay mifandray amin'ny aretina hyperproliferative maromaro 30 .Ireo angon-drakitra ireo dia manoro hevitra fa ny miRNA mpampiantrano fehezin'ny otrikaretina Toxoplasma dia molekiola manan-danja amin'ny fahaveloman'ny parasy sy ny pathogenesis amin'ny fitondran-tena biolojika mpampiantrano.
Ny miRNA novaina dia mety hisy fiantraikany amin'ny karazana fitondran-tena isan-karazany mandritra ny fanombohana sy ny fivoaran'ny sela maloto, ao anatin'izany ny gliomas: fahaleovan-tena amin'ny famantarana fitomboana, tsy fahatsapan-tena amin'ny famantarana manakana ny fitomboana, ny fialana amin'ny apoptose, ny mety ho replika tsy misy fetra, ny angiogenesis, ny fanafihana sy ny metastazy ary ny areti-maso.Ao amin'ny glioma, ny miRNA novaina dia hita tamin'ny fanadihadiana momba ny fanehoan-kevitra maromaro.
Tamin'ity fanadihadiana ity dia nanamafy ny haavon'ny miRNA-21 avo lenta amin'ny sela mpampiantrano voan'ny toxoplasma izahay.Ny miR-21 dia nofaritana ho iray amin'ireo microRNA be loatra matetika indrindra amin'ny fivontosana mafy, anisan'izany ny gliomas, 33 ary ny fiteniny dia mifandray amin'ny mari-pahaizana glioma.Ny porofo miangona dia milaza fa ny miR-21 dia oncogene vaovao izay miasa ho toy ny anton-javatra manohitra ny apoptotic amin'ny fitomboan'ny glioma ary mibaribary be loatra amin'ny tavy sy plasma amin'ny aretin'ny ati-doha olombelona.Mahaliana fa ny tsy fihetsehan'ny miR-21 amin'ny sela sy ny sela glioma dia miteraka ny fanakanana ny fihanaky ny sela noho ny apoptose miankina amin'ny caspase.Ny famakafakana bioinformatic momba ny tanjona vinavina miR-21 dia nanambara ireo fototarazo mpamono fivontosana mifandraika amin'ny lalan'ny apoptose, ao anatin'izany ny fahafatesan'ny sela 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, ary boaty forkhead O1 (FoxO1), miaraka amin'ny tranokala miR-2121..22.38.
FoxO1, amin'ny maha-iray amin'ireo anton-javatra transcription (FoxO), dia mandray anjara amin'ny fivoaran'ny karazana homamiadan'ny olombelona ary afaka mandrindra ny fanehoana ny fototarazon'ny fivontosana toy ny p21, p27, Bim, ary FasL40.FoxO1 dia afaka mamatotra sy manetsika ny tsingerin'ny sela toy ny p27 mba hanakanana ny fitomboan'ny sela.Ankoatr'izay, FoxO1 dia mpanentana lehibe amin'ny famantarana PI3K / Akt ary mandrindra ny fizotran'ny biolojika maro toy ny fivoaran'ny tsingerin'ny sela sy ny fanavahana sela amin'ny alàlan'ny fampahavitrihana ny transcription p2742.
Ho fehin-kevitra dia mino izahay fa ny exosomal miR-21 avy amin'ny microglia voan'ny Toxoplasma dia mety manana anjara toerana lehibe amin'ny maha-mpandrindra ny fitomboan'ny sela glioma (sary 7).Na izany aza, ilaina ny fandalinana fanampiny hahitana fifandraisana mivantana eo amin'ny exosomal miR-21, ny aretina Toxoplasma niova, ary ny fitomboan'ny glioma.Ireo vokatra ireo dia antenaina hanome teboka fanombohana amin'ny fandalinana ny fifandraisana misy eo amin'ny otrikaretina Toxoplasma sy ny trangan'ny glioma.
Ny kisary schematic momba ny mekanisma ny glioma (atidoha) carcinogenesis dia atolotra amin'ity fanadihadiana ity.Ny mpanoratra dia manao sary ao amin'ny PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
Ny protocole andrana rehetra amin'ity fandalinana ity, anisan'izany ny fampiasana biby, dia nifanaraka tamin'ny Seoul National University Care Animal Care and User Committee Standard Ethical Guidelines ary nankatoavin'ny Birao Review Institutional an'ny Seoul National University School of Medicine (IRB number SNU- 150715).-2).Ny fomba andrana rehetra dia natao araka ny tolo-kevitra ARRIVE.
Ny microglia totozy BV2 sy ny sela glioma olombelona U87 dia novolavolaina tao amin'ny Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) ary ny Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), tsirairay avy izay misy 10% serum foetal bovine, 4 mM l- glutamine, 0,2 mM penicillin ary 0,05 mM streptomycin.Ny sela dia nambolena tao anaty incubator misy CO2 5% amin'ny 37 ° C.Ny tsipika sela glioma iray hafa, U118, dia nampiasaina ho fampitahana amin'ny sela U87.
Mba hanavahana ny exosomes avy amin'ny T. gondii-infected RH sy ME49, T. gondii tachyzoites (RH strain) dia nojinjaina avy amin'ny vavonin'ny vavonin'ny totozy BALB / c 6 herinandro natsindrona 3-4 andro mialoha.Ny tachyzoites dia nosasana in-telo tamin'ny PBS ary nodiovina tamin'ny centrifugation tamin'ny 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia)43.Mba hahazoana tachyzoites amin'ny fikorontanan'ny ME49, ny totozy BALB / c dia nampidirina intraperitoneally miaraka amin'ny cysts tissue 20 ary ny fiovan'ny tachyzoite amin'ny cysts dia nangonina tamin'ny fanasana ny vavonin'ny kibo tamin'ny andro 6-8 taorian'ny aretina (PI).Voalavo voan'ny PBS.ME49 tachyzoites dia nitombo tao amin'ny sela nampiana 100 μg / ml penicillin (Gibco / BRL, Grand Island, NY, Etazonia), 100 μg / ml streptomycin (Gibco / BRL), ary 5% foetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD) .., Etazonia) amin'ny 37 ° C sy gazy karbonika 5%.Taorian'ny fambolena tao amin'ny sela Vero, ny tachyzoite ME49 dia nalefa indroa tamin'ny fanjaitra 25 gauge ary avy eo tamin'ny sivana 5 µm mba hanesorana ny potipoti-javatra sy ny sela.Taorian'ny fanasana dia naverina naverina tamin'ny PBS44 ny tachyzoites.Ny cysts amin'ny toxoplasma gondii strain ME49 dia nohazonina tamin'ny alàlan'ny tsindrona intraperitoneal ny kista mitoka-monina avy amin'ny atidohan'ny totozy C57BL / 6 voan'ny aretina (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).Ny atidohan'ny totozy voan'ny ME49 dia nojinjaina taorian'ny 3 volana tamin'ny PI ary nopotehina teo ambanin'ny mikraoskaopy mba hitokana ny kista.Ny totozy voan'ny aretina dia notazonina tao anatin'ny fepetra manokana tsy misy pathogen (SPF) ao amin'ny Sekoly momba ny fitsaboana ao amin'ny Oniversite Nasionaly Seoul.
Ny totalin'ny RNA dia nalaina avy amin'ny exosomes azo avy amin'ny BV2, sela BV2 ary tavy amin'ny fampiasana ny Kit Mini miRNeasy (Qiagen, Hilden, Alemaina) araka ny torolalan'ny mpanamboatra, anisan'izany ny fotoana incubation ho an'ny dingana elution.Ny fifantohan'ny ARN dia nofaritana tamin'ny spectrophotometer NanoDrop 2000.Ny kalitaon'ny microarrays RNA dia nodinihina tamin'ny fampiasana bioanalyzer Agilent 2100 (Agilent Technologies, Amstelveen, Holandy).
DMEM miaraka amin'ny 10% exosome-mahantra FBS dia nomanina tamin'ny ultracentrifugation amin'ny 100,000g mandritra ny 16 ora amin'ny 4 ° C ary voasivana amin'ny sivana 0.22 µm (Nalgene, Rochester, NY, USA).Ny sela BV2, 5 × 105, dia novolavolaina tao amin'ny DMEM misy 10% exosome-depleted FBS ary 1% antibiotika amin'ny 37 ° C sy 5% CO2.Taorian'ny 24 ora incubation, tachyzoites amin'ny strain RH na ME49 (MOI = 10) dia nampiana tao amin'ny sela ary ny parasy tsy manafika dia nesorina tao anatin'ny adiny iray ary nameno ny DMEM.Ny exosomes avy amin'ny sela BV2 dia notokanana tamin'ny alàlan'ny centrifugation differential novaina, ny fomba be mpampiasa indrindra.Atsaharo ny pellet exosome amin'ny 300 µl PBS ho an'ny famakafakana RNA na proteinina.Ny fifantohana amin'ny exosomes mitoka-monina dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny kitapom-panadinana proteinina BCA (Pierce, Rockford, IL, Etazonia) ary ny spektrofotometer NanoDrop 2000.
Ny entona avy amin'ny sela BV2 na ny exosomes azo avy amin'ny BV2 dia nalaina tao amin'ny vahaolana fitrandrahana proteinina PRO-PREP ™ (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) ary ny proteinina dia nampidirina tao amin'ny Coomassie manga mamirapiratra voaloko 10% SDS polyacrylamide gels.Ankoatr'izay, ny proteinina dia nafindra tao amin'ny membrane PVDF nandritra ny 2 ora.Ny blots tandrefana dia nohamarinina tamin'ny fampiasana ny antibody Alix (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) ho marika exosomal.HRP-conjugated goat anti-mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) ary LAS-1000 plus luminescent image analyzer (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) dia nampiasaina ho antibody faharoa..Ny microscopie electron transmission dia natao handinihana ny habeny sy ny morphologie ny exosomes.Ny exosomes tafasaraka amin'ny sela BV2 (6.40 µg/µl) dia nomanina tamin'ny harato misy karbaona ary nolokoina tamin'ny 2% uranyl acetate nandritra ny 1 min.Ny santionany voaomana dia voamarika tamin'ny voltase haingana 80 kV tamin'ny fampiasana JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japana) miaraka amin'ny fakan-tsary ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, Etazonia).
Ny exosomes avy amin'ny BV2 dia nopotehina tamin'ny fampiasana PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia) nandritra ny 15 minitra tamin'ny mari-pana amin'ny efitrano.Ny sela U87, 2 × 105, miaraka amin'ny exosomes PKH26 misy marika (mena) na tsy misy exosome ho toy ny fanaraha-maso ratsy, dia nampidirina tao amin'ny 37 ° C nandritra ny 24 ora tao amin'ny 5% CO2 incubator.Ny nuclei sela U87 dia voapoizina tamin'ny DAPI (manga), ny sela U87 dia napetraka tao amin'ny 4% paraformaldehyde ho an'ny 15 min amin'ny 4 ° C ary avy eo nodinihina tao amin'ny rafitra microscope confocal Leica TCS SP8 STED CW (Leica Microsystems, Mannheim, Germany).azo jerena.
Ny cDNA dia novolavolaina avy amin'ny siRNA tamin'ny alàlan'ny Mir-X siRNA voalohany synthesis strand sy SYBR qRT-PCR kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japana).Ny PCR amin'ny fotoana tena izy dia natao tamin'ny alàlan'ny rafitra fitiliana PCR iQ5 tena izy (Bio-Rad, Hercules, CA, Etazonia) tamin'ny fampiasana primer sy môdely mifangaro amin'ny SYBR Premix.Ny ADN dia nohamafisina nandritra ny cycles denaturation 40 tamin'ny 95 ° C nandritra ny 15 s ary nariana tamin'ny 60 ° C nandritra ny 60 s.Ny angon-drakitra avy amin'ny fanehoan-kevitry ny PCR tsirairay dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny mody famakafakana data an'ny rindrambaiko rafitra optika iQ™5 (Bio-Rad).Ny fiovana mifandraika amin'ny fanehoana ny fototarazo eo amin'ny fototarazo kendrena voafantina sy ny β-actin/siRNA (sy U6) dia nokajiana tamin'ny alàlan'ny fomba curve mahazatra.Ny filaharana voalohany ampiasaina dia aseho amin'ny tabilao 1.
Ny sela glioma 3 x 104 U87 dia nafafy tamin'ny takelaka 96-well ary nifangaro tamin'ny exosomes voan'ny Toxoplasma avy amin'ny BV2 (50 μg / mL) na exosome nonpulse avy amin'ny BV2 (50 μg / mL) ho fanaraha-maso amin'ny 12, 18 sy 36 ora. .Ny taham-pitomboan'ny sela dia nofaritana tamin'ny fampiasana ny Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japana) (Tarehimarika fanampiny S1-S3) 46.
Ny totozy miboridana BALB/c vavy 5 herinandro dia novidina tao amin'ny Orient Bio (Seongnam-si, Korea Atsimo) ary notehirizina tsirairay tao anaty cages sterile amin'ny mari-pana (22±2°C) sy ny hamandoana (45±15°C).%) amin'ny mari-pana (22±2°C) sy ny hamandoana (45±15%).Ny tsingerin'ny hazavana 12 ora sy ny tsingerina maizina 12 ora dia natao teo ambanin'ny SPF (Sekoly Nasionaly momba ny fitsaboana biby any Seoul).Ny totozy dia nozaraina ho vondrona telo misy totozy 5 tsirairay ary ny vondrona rehetra dia natsindrona subcutaneously miaraka amin'ny 400 ml PBS misy sela glioma 1 x 107 U87 ary ny fitomboan'ny fitomboana dia mampihena ny BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, Etazonia).Enina andro taorian'ny tsindrona fivontosana, 200 mg ny exosomes azo avy amin'ny sela BV2 (misy/tsy misy otrikaretina Toxoplasma) dia natsindrona tao amin'ny toerana fivontosana.Roa amby roapolo andro taorian'ny fifindran'ny fivontosana, dia norefesina tamin'ny caliper in-telo isan-kerinandro ny haben'ny fivontosan'ny totozy ao amin'ny vondrona tsirairay, ary ny habetsaky ny fivontosana dia nokajiana tamin'ny formula: 0,5 × (sakany) × 2 × lavany.
Famakafakana fanehoan-kevitra MicroRNA mampiasa miRCURYTM LNA miRNA array, taranaka faha-7 manana, mmu sy rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Danemark) mandrakotra totozy 1119 voafaritra tsara eo amin'ny 3100 olombelona, ​​totozy ary voalavo miRNA fisamborana probes.Nandritra ity dingana ity, ny 250 hatramin'ny 1000 ng ny totalin'ny ARN dia nesorina tamin'ny 5′-phosphate tamin'ny fitsaboana amin'ny phosphatase alkaline intestinal zanak'omby arahin'ny fametahana amin'ny loko maitso maitso Hy3.Ny santionany misy marika dia natambatra tamin'ny alàlan'ny fametahana slides microarray amin'ny alàlan'ny kitapo hybridization chamber (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) ary kitapo mipetaka hybridization (Agilent Technologies).Ny Hybridization dia natao nandritra ny 16 ora tamin'ny 56 ° C, avy eo dia nanasa ny microarrays araka ny tolo-kevitry ny mpanamboatra.Ireo slide microarray efa nokarakaraina dia nojerena tamin'ny alàlan'ny rafitra scanner microarray Agilent G2565CA (Agilent Technologies).Ny sary notarafina dia nafarana tamin'ny fampiasana rindrambaiko Agilent Feature Extraction version 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ary ny hamafin'ny fluorescence amin'ny sary tsirairay dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny rakitra GAL mifanaraka amin'ny protocol Exiqon novaina.Ny angon-drakitra microarray ho an'ny fandalinana ankehitriny dia apetraka ao amin'ny tahiry GEO eo ambanin'ny laharana fidirana GPL32397.
Ny mombamomba ny fanehoan-kevitry ny miRNA exosomal matotra ao amin'ny microglia an'ny RH na ME49 voan'ny Toxoplasma dia nodinihina tamin'ny fampiasana fitaovana tambajotra isan-karazany.Ny miRNA mifandray amin'ny fivoaran'ny fivontosana dia fantatra amin'ny fampiasana miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ary voasivana miaraka amin'ny mari-pamantarana mahazatra (log2) mihoatra ny 8.0.Anisan'ireo miRNAs, ny miRNAs amin'ny fomba samihafa dia hita fa mihoatra ny 1,5 heny novaina tamin'ny alàlan'ny famakafakana sivana ny miRNA novain'ny RH na ME49 voan'ny T. gondii.
Ny sela dia nafafy tamin'ny takelaka enina (3 x 105 cell / well) ao amin'ny opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) mampiasa Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).Nokolokoloina nandritra ny 6 ora ny sela nafindra ary avy eo dia novaina ho antonony feno vaovao.Ny sela dia nojinjaina 24 ora taorian'ny famindrana.
Ny famakafakana statistika dia natao indrindra tamin'ny fampiasana ny t-test an'ny Student miaraka amin'ny rindrambaiko Excel (Microsoft, Washington, DC, Etazonia).Ho an'ny famakafakana biby andrana dia nisy ANOVA roa tonta natao tamin'ny alàlan'ny rindrambaiko Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). P-values ​​<0.05 dia heverina ho manan-danja ara-statistika. P-values ​​<0.05 dia noheverina ho manan-danja ara-statistika. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Ny sanda P <0.05 dia heverina ho manan-danja ara-statistika. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 P < 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Ny sanda P <0.05 dia heverina ho manan-danja ara-statistika.
Ny protocole andrana rehetra ampiasaina amin'ity fandalinana ity dia nankatoavin'ny Birao Review Institutional an'ny Seoul National University School of Medicine (IRB isa SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.Tombanana ny isan'ny homamiadana maneran-tany sy ny fahafatesana amin'ny taona 2018: loharano sy fomba fiasa GLOBOCAN.Interpretation.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Fahafantarana ny mety ho anton'ny fivontosana ao amin'ny atidoha sy ny fitsabahan'izy ireo amin'ny fitsaboana. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Fahafantarana ny mety ho anton'ny fivontosana ao amin'ny atidoha sy ny fitsabahan'izy ireo amin'ny fitsaboana.Rashid, S., Rehman, K. ary Akash, MS Famerenana ny toe-javatra mety hampidi-doza ho an'ny fivontosan'ny atidoha sy ny fitsaboana lehibe. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Fahatakarana lalina momba ny loza ateraky ny fivontosan'ny atidoha sy ny fitsaboana amin'ny fitsaboana.Rashid, S., Rehman, K. ary Akash, MS Famerenana ny toe-javatra mety hampidi-doza ho an'ny fivontosan'ny atidoha sy ny fitsaboana lehibe.Siansa biomedical.Pharmacist.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Fifandraisana bakteria-viral amin'ny orodigestive sy ny homamiadan'ny taovam-pananahana vehivavy: famintinana ny porofo momba ny epidemiolojika sy ny laboratoara. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Fifandraisana bakteria-viral amin'ny orodigestive sy ny homamiadan'ny taovam-pananahana vehivavy: famintinana ny porofo momba ny epidemiolojika sy ny laboratoara.Kato I., Zhang J. ary Sun J. Fifandraisana amin'ny bakteria-virily amin'ny homamiadan'ny taovam-pananahana sy ny taovam-pananahana vehivavy: famintinana ny angona epidemiolojika sy laboratoara. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J.结. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Fifandraisana bakteria-viral amin'ny fandevonan-kanina ny vavan'ny olombelona sy ny trakta fananahana vehivavy: famintinana ny siansa malaza sy ny porofo momba ny laboratoara.Kato I., Zhang J. ary Sun J. Fifandraisana bakteria-viral amin'ny homamiadan'ny gastrointestinal olombelona sy ny homamiadan'ny taovam-pananahana vehivavy: famintinana ny angona epidemiolojika sy laboratoara.Cancer 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Avy amin'ny otrikaretina mankany amin'ny homamiadana: Ahoana ny fiovan'ny viriosy fivontosana ADN ny karbônina afovoany sy ny metabolisma lipida. Magon, KL & Parish, JL Avy amin'ny otrikaretina mankany amin'ny homamiadana: Ahoana ny fiovan'ny viriosy fivontosana ADN ny karbônina afovoany sy ny metabolisma lipida.Mahon, KL ary Parish, JL Fire infection amin'ny homamiadana: ahoana ny fiovan'ny viriosy fivontosana mifototra amin'ny ADN ny karbônina afovoany sy ny metabolisma lipida. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢。 Magon, KL & Parish, JL Avy amin'ny otrikaretina mankany amin'ny homamiadana: ahoana ny fiovan'ny viriosy tumor ADN ny karbônina afovoany sy ny metabolisma lipida.Mahon, KL ary Parish, JL Mamono otrikaretina amin'ny homamiadana: ahoana ny fiovan'ny viriosy ADN ny karbônina sy lipid metabolism ao amin'ny sela mpampiantrano.Open Biology.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Catechol estrogens amin'ny schistosomes sy ny atiny ary ny homamiadana mifandray amin'ny helminth.anoloana.mafana ao anatiny.5, 444 (2014).